[发明专利]用于检测自身抗体的组合物、试剂盒和方法

说明书

提供了可用于诊断涉及自身抗体的甲状腺疾病的试剂盒、组合物和方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年3月12日提交的美国临时申请号62/817,458的权益，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本文描述的主题涉及可用于诊断涉及自身抗体的甲状腺疾病的试剂盒组合物和方法。

背景技术

甲状腺功能障碍影响了一般人群中估计1％至10％的成年人。许多甲状腺疾病，包括格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、甲状腺功能亢进症、甲状腺功能减退症(包括新生儿甲状腺功能减退症)、无肿大甲状腺功能减退症、甲状腺功能正常或甲状腺功能减退的自身免疫性甲状腺炎和原发性粘液性水肿和特发性粘液性水肿，涉及自身抗体(识别并结合存在于甲状腺上的受体从而导致甲状腺激素产生的不想要的变化的甲状腺刺激免疫球蛋白(TSI)和/或甲状腺阻断免疫球蛋白(TBI))的活动。

虽然诊断技术可用于检测这些自身抗体，但这些技术中的许多是繁琐、费力的，不能区分TSI与TBI和/或缺乏足够的灵敏度和/或特异性。

发明内容

下面描述和举例说明的以下方面和实施方案旨在是示例性和举例说明性的，而不是限制范围。

本公开内容提供用于检测和/或区分甲状腺刺激抗体(TSI)和甲状腺阻断抗体(TBI)的试剂盒、组合物和方法。

在一个方面，提供了包含用第一表达载体和第二表达载体稳定转染的转基因细胞和不含细胞裂解剂的反应缓冲液的试剂盒，所述缓冲液任选地包含所述报告因子的底物。在这些提供的试剂盒中，第一表达载体包含编码嵌合或野生型TSH受体的核苷酸序列，而第二表达载体包含编码报告因子的合成核苷酸序列，并且所述合成核苷酸序列(1)与cAMP诱导型启动子可操作地连接和/或(2)进一步编码异源cAMP结合蛋白，其中所述cAMP结合蛋白与所述报告因子融合。在这些提供的试剂盒中，报告因子的表达与检测到的细胞内信号相关。

在一些实施方案中，在不裂解转基因细胞的情况下检测细胞内信号。在其他实施方案中，细胞内信号在细胞内产生并在细胞外检测。在其他实施方案中，报告因子是连续表达以产生在与底物催化反应时在细胞内产生信号的报告因子的蛋白质。

在另一方面，提供了用于检测样品中的甲状腺刺激和/或甲状腺阻断自身抗体的方法，其包括：(a)将转基因细胞与怀疑包含甲状腺刺激和/或甲状腺阻断自身抗体的样品接触，其中转基因细胞用第一表达载体和第二表达载体稳定转染，并且(b)检测与报告因子表达相关的细胞内信号。在这些提供的方法中，第一表达载体包含编码嵌合或野生型TSH受体的核苷酸序列，而第二表达载体包含编码报告因子的合成核苷酸序列，并且所述合成核苷酸序列(1)与cAMP诱导型启动子可操作地连接和/或(2)进一步编码异源cAMP结合蛋白，其中所述cAMP结合蛋白与所述报告因子融合。

附图简要说明

图1显示了从本文公开的针对TSI/TBI的体内测定获得的纯样品与稀释样品(正常、低TSI和高TSI)的信号背景比(S/B)。(参见实施例1)

图2显示了比较包括洗涤步骤与不包括洗涤步骤的方案的实验结果。图2显示了从本文公开的针对TSI/TBI的体内测定获得的样品(正常、低TSI和高TSI)的信号背景比。(参见实施例1)

图3A-3C显示了来自比较包括过夜细胞接种步骤与两小时细胞接种步骤的方案的实验的结果。图3A显示使用抗体标准物(甲状腺刺激抗体M22)的滴定曲线和计算的EC₅₀值。图3B显示了四个阴性(NS1、NS2、NS3和NS4)和四个阳性(PS1、PS2、PS3和PS4)样品的信号与参考比。图3C显示了每个阳性样品的反应，计算为相对于阴性样品的平均值的反应倍数。(参见实施例1)