[发明专利]用于检测自身抗体的组合物、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种试剂盒，其包含：

(a)用以下物质稳定转染的转基因细胞：

(i)包含编码嵌合促甲状腺激素(TSH)受体的核苷酸序列的第一表达载体，和

(ii)包含编码报告因子的合成核苷酸序列的第二表达载体，其中所述合成核苷酸序列：

(1)与cAMP诱导型启动子可操作地连接；和/或

(2)进一步编码异源cAMP结合蛋白，其中所述cAMP结合蛋白与所述报告因子融合；和

(b)不含细胞裂解剂的反应缓冲液，所述缓冲液任选地包含所述报告因子的底物，

其中所述报告因子的表达与细胞内信号相关。

2.权利要求1的试剂盒，其中cAMP的存在增加所述报告因子的表达，从而增强信号。

3.权利要求1的试剂盒，其中cAMP与异源结合位点的结合诱导增强信号的所述报告因子中的构象变化。

4.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中所述嵌合TSH受体包含人TSH受体序列。

5.权利要求4的试剂盒，其中所述嵌合TSH受体是ChR4。

6.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中所述报告因子包含萤光素酶多肽。

7.权利要求6的试剂盒，其中所述萤光素酶多肽是修饰的萤光素酶。

8.权利要求7的试剂盒，其中所述修饰的萤光素酶是循环排列的萤光素酶。

9.权利要求6-8中任一项的试剂盒，其中所述底物包括萤光素。

10.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中所述细胞内信号包括发光。

11.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中所述转基因细胞包括哺乳动物细胞。

12.权利要求11的试剂盒，其中所述哺乳动物细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或人RD细胞。

13.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中所述转基因细胞还包含报告因子的底物。

14.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中所述反应缓冲液包含聚乙二醇和蔗糖。

15.权利要求14的试剂盒，其中所述反应缓冲液还包含白蛋白。

16.权利要求15的试剂盒，其中所述白蛋白包括牛血清白蛋白。

17.前述权利要求中任一项的试剂盒，其中所述试剂盒不包含细胞裂解剂。

18.一种检测样品中的甲状腺刺激和/或甲状腺阻断自身抗体的方法，其包括：

(a)将转基因细胞与怀疑包含甲状腺刺激和/或甲状腺阻断自身抗体的样品接触，其中所述转基因细胞用以下物质稳定转染：

(i)包含编码嵌合促甲状腺激素(TSH)受体的核苷酸序列的第一表达载体，和

(ii)包含编码报告因子的合成核苷酸序列的第二表达载体，其中所述合成核苷酸序列：

(1)与cAMP诱导型启动子可操作地连接；和/或

(2)进一步编码异源cAMP结合蛋白，其中所述cAMP结合蛋白与所述报告因子融合；和

(b)检测与报告因子的表达相关的细胞内信号。

19.权利要求18的方法，其中所述转基因细胞还包含报告因子的底物。

20.权利要求18或19的方法，其中所述接触步骤包括在包含报告因子的底物的缓冲液中接触。