[发明专利]用于微生物的长期监控的新型取样方法

说明书

本发明总的来说涉及表面上生物污染物的检测的领域，具体地涉及包括以下步骤的方法：提供一块或多块无菌且无核苷酸的黏着纤维材料，将所述一块或多块纤维材料附着到所述表面，从所述表面收集所述一块或多块纤维材料，在溶剂中温育所述一块或多块纤维材料，并对所述溶剂进行生物污染物的存在的分析。本发明进一步涉及包括无菌载体和用于微生物的长期监控的说明书的部件试剂盒。

技术领域

本发明总的来说涉及表面上生物污染物的检测的领域，具体地涉及包括以下步骤的方法：提供一块或多块无菌且无核苷酸的黏着纤维材料，将所述一块或多块纤维材料附着到所述表面，从所述表面收集所述一块或多块纤维材料，在溶剂中温育所述一块或多块纤维材料，并对所述溶剂进行生物污染物的存在的分析。本发明进一步涉及无菌载体和包括无菌载体和用于微生物的长期监控的像说明书那样的进一步部件的部件试剂盒。

背景技术

食物传染病原体可导致严重疾病和死亡。进一步地，召回可能污染的物品导致显著的经济损失。一个突出的例子是单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes），一种革兰氏阳性、兼性厌氧和普遍存在的人病原体，其具有黏着到食物加工环境中通常遇到的表面的能力（Silva S等人, J Food Prot. 2008;71(7):1379-1385）。李斯特菌病的爆发继续零星发生，且死亡率高达20%。由于单核细胞增生李斯特氏菌能够在冷藏条件下生长（4℃，Gandhi M等人, Int J Food Microbiol. 2007;113(1):1-15）并且由于临床症状常常只有在延误后才搜集，所以李斯特菌病是尤其严重的诊断。由于这些原因，对于清洗、消毒和监控食物传染病原体的国家和国际标准和规定对现成可食的食物中的单核细胞增生李斯特氏菌执行零容忍（Public Health England. Detection and Enumeration of Bacteria in Swabs and Other Environmental Samples.; 2017；Pueyo a E等人,Guidelines on sampling the food processing area and equipment for thedetection of Listeria monocytogenes. 2012:15 www.anses.fr.）。然而，只有具有最低检出限的最可靠的方法将实现所述目标。用于监控病原体的常用测定包括基于生长的常规微生物学方法，且因此执行起来耗时（作者不详; Microbiology of Food and AnimalFeeding Stuffs—Horizontal Methods for Sampling Techniques from SurfacesUsing Contact Plates and Swabs. International Organization forStandardization: Geneva, 瑞士; 2004）。为了减少处理时间和成本，正在研究更快且更可靠的备择检测方法。

相对于基于生长的方法有希望的改变是定量聚合酶链反应（qPCR），其提供更快的结果。理论上，所述方法的检出限接近靶基因的一个拷贝（Rossmanith P和Wagner M., J Food Prot. 2011;74(9):1404-1412）。实际上，其是在过去几年中已经历了巨大的发展进步的尤其灵敏的工具。尽管qPCR不能区别活细胞和死细胞，但结果反映了（现在或过去）污染的发生，包括活的但不可培养的细胞（VBNC）的存在。