[发明专利]在线色谱法和电喷雾电离质谱仪

说明书

提供了用于使用在线色谱法和电喷雾电离质谱法表征蛋白质的方法和系统。

技术领域

本发明总体上涉及一种用于使用在线色谱法和电喷雾电离质谱法表征蛋白质生物制剂的方法。

背景技术

蛋白质生物制剂产品已作为用于治疗癌症、自身免疫性疾病、感染和心脏代谢病症的重要药物出现，并且它们代表医药工业中增长最快的产品类中的一种。

蛋白质生物制剂产品必须满足非常高的纯度标准。因此，可能重要的是在药物开发和生产的不同阶段期间监测并表征蛋白质生物制剂。用于表征此类蛋白质生物制剂的测定的分析方法应显示出足够的准确性和分辨率，以检测并定量所需产品。由于蛋白质生物制剂与其突变形式或修饰形式或裂解形式相比在结构和物理化学性质之间存在相似性，评估可能很困难。直接分析可能要求足够大量地分离产品以用于测定，这是不希望的，并且仅在所选定的情况下是可能的。

本领域长期迫切需要一种用于表征蛋白质生物制剂的方法和/或系统。

发明内容

蛋白质生物制剂产品的开发、制造和销售的增长导致对表征蛋白质生物制剂以及可能的杂质、结合化学计量及其总体组成的需求逐渐增加。

本文公开的示例性实施方案通过提供用于表征、鉴别和/或定量蛋白质生物制剂以及其可能的杂质、结合和总体组成的方法来满足上述需求。

本公开至少部分地提供了一种用于表征蛋白质的方法。在一个示例性实施方案中，用于表征蛋白质的方法包括使包含所述蛋白质的样品与具有色谱树脂的色谱系统接触，使用流动相洗涤所述树脂以提供包含所述蛋白质的洗脱液，以及使用电喷雾电离质谱仪表征所述洗脱液中的所述蛋白质。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括具有尺寸排阻色谱树脂的色谱系统

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括将电喷雾电离质谱仪耦接至具有色谱树脂的色谱系统。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括将电喷雾电离质谱仪耦接至具有尺寸排阻色谱树脂的色谱系统。

在一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括在天然条件下运行的电喷雾电离质谱仪。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括纳米电喷雾电离质谱仪。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括在天然条件下运行的纳米电喷雾电离质谱仪。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括至少一个三路分流器，以将电喷雾电离质谱仪耦接至具有树脂的色谱系统。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括至少一个三路分流器，以将紫外光检测器耦接至具有树脂的色谱系统。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括至少一个三路分流器，以将紫外光检测器和电喷雾电离质谱仪耦接至具有树脂的色谱系统。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括至少一个三路分流器，以将电喷雾电离质谱仪耦接至具有尺寸排阻色谱树脂的色谱系统。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括至少一个三路分流器，以将紫外光检测器耦接至具有尺寸排阻色谱树脂的色谱系统。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括至少一个三路分流器，以将紫外光检测器和电喷雾电离质谱仪耦接至具有尺寸排阻色谱树脂的色谱系统。

在此实施方案的一个方面，用于表征蛋白质的方法可包括使用流动相洗涤树脂以提供包含所述蛋白质的洗脱液，其中所述洗脱液通过至少一个三路分流器以约0.2mL/min至约0.4mL/min的流速引入到紫外光检测器中。