[发明专利]多种核酸共标记支持物及其制作方法与应用

权利要求书

1.一种多种核酸共标记的支持物，其包括支持物本体以及位于支持物本体表面和/或内部的多种核酸标记，单个支持物上标记的核酸至少包括：一或多个第一核酸标记，其作用至少包括捕获反应体系中的特定化合物到支持物表面；一或多个第二核酸标记，其作用至少包括可以参与到捕获到支持物表面的特定化合物的指定生物化学反应过程。

2.根据权利要求1所述的多种核酸共标记的支持物，其中，所述支持物本体为固体珠子和/或半固态水凝胶珠。

3.根据权利要求1所述的多种核酸共标记的支持物，其为包括多个支持物的组合物。

4.根据权利要求3所述的多种核酸共标记的支持物，其中，同一支持物上的第一核酸标记、第二核酸标记的数量可以分别≥1个和/或≤10¹³个。

5.根据权利要求3所述的多种核酸共标记的支持物，其中，

同一支持物上的多个第一核酸标记的序列相同或不同；

不同支持物上的第一核酸标记的序列相同或不同；

同一支持物上的多个第二核酸标记的序列相同或不同；或

不同支持物上的第二核酸标记的序列相同或不同。

6.权利要求1～5任一项所述的多种核酸共标记的支持物的制作方法，该方法包括：

将多种核酸通过接枝到和/或接枝于的方式标记到支持物本体上，得到多种核酸共标记的支持物。

7.根据权利要求6所述的制作方法，其包括：

将支持物本体和核酸分别修饰上能相互作用的功能单位，使二者反应将核酸标记到支持物本体上；

按照预设好的核苷酸序列将核酸直接合成在支持物本体上；和/或

采用生物化学反应进行核酸延伸或连接的方案在支持物本体上进行核酸标记。

8.权利要求1～5任一项所述的多种核酸共标记的支持物在5’单细胞RNA表达谱分析、构建微孔阵列平台的5’单细胞VDJ文库、构建3’单细胞RNA文库、构建单细胞转录组文库、单细胞多组学研究、多重PCR和/或构建多重PCR测序文库中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其中，所述的多种核酸共标记的支持物是用于5’单细胞RNA表达谱分析：其中：

支持物上固定有含有细胞标签与分子标签的模板转换序列以及RNA捕获序列，具体地，支持物上标记了至少两种核酸序列：第一核酸序列和第二核酸序列；第一核酸序列至少包含捕获序列，用于捕获目的核酸分子并作为引物延伸或逆转录；第二核酸序列包括细胞标签序列，细胞标签序列用于标记来源于同一细胞中的所有mRNA的分子；不同种类的支持物上具有不同的细胞标签；

优选地，使得支持物在芯片的微孔中捕获单细胞裂解后释放的RNA，并在逆转录过程中通过模板转换实现对来源于同一细胞的RNA标记相同的细胞标签，而后通过扩增实现cDNA扩增并最终构建为5’单细胞RNA表达谱文库。