[发明专利]一种人脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法及应用

权利要求书

1.一种人脐带间充质干细胞来源的外泌体的制备方法，包括以下步骤：

1)将人脐带间充质干细胞接种至含胎牛血清的低糖DMEM培养基中进行第一扩增培养，至细胞融合至70％～80％时，转接细胞至无血清培养基进行第二扩增培养45～50h，收集上清，得到含外泌体上清；

2)将所述含外泌体上清于1800～2200g第一离心25～35min，收集第一上清；将所述第一上清于8000～12000g第二离心25～35min，收集第二上清；将所述第二上清于1400～1600g第三离心25～30min，收集第三上清；

3)将所述第三上清和exosome提取试剂混合，于1～5℃条件下提取9～16h，得到提取液；将所述提取液于1400～1600g离心25～30min，收集沉淀，重悬沉淀，得到人脐带间充质干细胞来源的外泌体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述人脐带间充质干细胞包括3～5代人脐带间充质干细胞。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述低糖DMEM培养基中胎牛血清的体积百分含量为8％～12％。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述第一扩增培养和第二扩增培养的温度独立为35～38℃；所述第一扩增培养和第二扩增培养的二氧化碳浓度独立为4％～6％。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中所述重悬沉淀采用的试剂包括磷酸缓冲盐溶液。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述重悬沉淀后，还包括依次对重悬液进行洗涤和0.22μm无菌滤膜过滤。

7.权利要求1～6任意一项所述制备方法制备得到的人脐带间充质干细胞来源的外泌体在制备治疗非酒精性脂肪肝的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述人脐带间充质干细胞来源的外泌体通过增强AMPK活性和/或抑制肝细胞脂肪变性来治疗非酒精性脂肪肝。