[发明专利]结核分枝杆菌异质性耐药检测方法、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种结核分枝杆菌异质性耐药检测方法，该方法用于非疾病检测，其特征在于，所述方法包括：

分别利用引物混合物1和引物混合物2对核分枝杆菌的DNA进行多重PCR扩增，获得多重PCR扩增产物1和多重PCR扩增产物2；

所述的引物混合物1为分别包含SEQ ID NO：9～14、SEQ ID NO：17～20、SEQ ID NO：23～24、SEQ ID NO：27～28所示序列；

所述的引物混合物2为分别包含SEQ ID NO：1～8、SEQ ID NO：15～16、SEQ ID NO：21～22、SEQ ID NO：25～26、SEQ ID NO：29～30所示序列。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述引物混合物1为SEQ ID NO：39、40、41、42、43、44、47、48、49、50、53、54、57和58所示引物的混合物；

任选地，所述SEQ ID NO：39、40、41、42、43、44、47、48、49、50、53、54、57和58所示引物的摩尔浓度比为17.4：17.4：17.75：17.75：11.83：11.83：17.75：17.75：13.96：13.96：10.06：10.06：11.24：11.24。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的引物混合物2为SEQ ID NO:31、32、33、34、35、36、37、38、45、46、51、52、55、56、59和60所示引物的混合物；

任选地，所述SEQ ID NO:31、32、33、34、35、36、37、38、45、46、51、52、55、56、59和60所示引物的摩尔浓度比为9.01：9.01：10.81：10.81：12.31：12.31：12.31：12.31：24.32：24.32：10.41：10.41：10.41：10.41：10.41：10.41。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述方法还包括：

PCR扩增多重PCR扩增产物1和多重PCR扩增产物2，得到PCR产物；

将PCR产物进行测序，获得测序数据；

分析测序数据，得到结核分枝杆菌异质性耐药突变种类。

任选地，多重PCR扩增产物1和多重PCR扩增产物2等量混合后进行PCR扩增，得到PCR产物。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述突变的突变频率不低于0.1％；

任选地，所述突变的突变频率为0.1％～1％。

6.根据权利要求4所示的检测方法，其特征在于，所述分析采用的方法包括：

将同一目标区域相同标记的正反向两条测序数据进行比对；

保留比对后基因型相同的数据并标记为一条有效数据，去除比对后基因型不相同的数据；

同一目标区域的有效数据中突变位点为结核分枝杆菌异质性耐药性突变；

任选地，所述结核分枝杆菌异质性耐药性突变的有效数据的数目不低于10条。

7.根据权利要求6所示的检测方法，其特征在于，所述分析采用的方法还包括：去除目标区域测序数据的两端20nt的序列。

8.一种结核分枝杆菌异质性耐药检测系统，其特征在于,所述系统包括多个单元，所述单元用于执行权利要求1-7任一所述的方法的步骤。

9.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含SEQ ID NO：39、40、41、42、43、44、47、48、49、50、53、54、57和58所示引物的混合物1和SEQ ID NO:31、32、33、34、35、36、37、38、45、46、51、52、55、56、59和60所示引物的混合物2；

任选地，所述试剂盒还包含SEQ ID NO：61、62所示的引物；

任选地，所述试剂盒还包括TAKARA公司的货号为9165A的试剂盒中试剂。

10.权利要求1-7任一所述的检测方法、权利要求8所述的检测系统或权利要求9所述的试剂盒在检测结核分枝杆菌异质性耐药中的应用。