[发明专利]一种在废羊毛提取角蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种在废羊毛提取角蛋白的方法，将羊毛在0.1%的TWEEN20溶液中洗涤2h，而后用水冲洗，真空过滤在Whatman#2纸上.浸泡在氯仿/甲醇混合物(2：1，v/v)中24h，并再次真空过滤在Whatman#2纸上过滤，更温和，并产生了更宽的分子量范围的角蛋白片段，鉴于羊毛蛋白的非均匀性质，没有观察到单个分子量片段，过氧乙酸(PAA)氧化产生分子量60K的最大可溶性片段，凝胶上没有保留低分子量片段，碳酸氢盐(PCC)氧化产生的碎片在50‑200K范围内。

技术领域

本发明是一种在废羊毛提取角蛋白的方法，属于羊毛角蛋白提取领域。

背景技术

全世界每年都有数以万吨计的羊毛角蛋白被填埋，不仅造成资源的巨大浪费，也导致了严重的环境污染问题。废弃羊毛是一种重要、廉价的角蛋白资源之一，具有极高的研究利用价值，过去十年来，利用废旧角蛋白作为一种生物技术资源的研究激增，具有可溶性或至少半溶性底物对于大多数蛋白质修饰过程是必不可少的，角蛋白的高二硫交联结构是一个挑战。

发明内容

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种在废羊毛提取角蛋白的方法，包括以下步骤；

A.将羊毛在0.1%的TWEEN20溶液中洗涤2h，而后用水冲洗，真空过滤在Whatman#2纸上；

B.浸泡在氯仿/甲醇混合物(2：1，v/v)中24h，并再次真空过滤在Whatman#2纸上过滤；

C.用正己烷在Soxhlet提取6h，提取后，进行风干，并在真空下保存，

带溶剂蒸发至干燥，残余脂质称重；

D.在正己烷前后~0.5g羊毛样品上测定水分和灰分，在50˚C下真空干燥48h，然后在除湿器中冷却并称重，并转移到瓷盘中，并加热搅拌2h，然后冷却并称重；

E.用氯仿萃取6MHCl水解的羊毛，用正己烷萃取测定羊毛的脂质，将含脂的提取溶剂转移到称重的洗涤皿中，在溶剂蒸发至干燥后重新称重；

F.对0.5g至2.0g批次提取的羊毛纤维进行初步增溶实验，比较采用1.0g样品进行氧化还原（不涉及尿素），通过真空过滤在定性滤纸上去除任何剩余的纤维后，初步步骤的增溶；

G.离心30分钟从而分离可溶性和不溶性并在6000-8000MWCO（分子量切断）油管中，用去离子水对离心后的上清液和固体组分进行透析，然后进行裂解；

H.羊毛纤维在37˚C和180rpm条件下在2%过氧乙酸中氧化静制8h，然后用水过滤和洗涤；

I.用100mM的Tris碱(pH10.5)在37˚C和180rpm下提取氧化纤维，用0.5MHCl调节到pH4，沉淀蛋白质，而后提取蛋白质。

有益效果

本发明更温和，并产生了更宽的分子量范围的角蛋白片段，鉴于羊毛蛋白的非均匀性质，没有观察到单个分子量片段，过氧乙酸(PAA)氧化产生分子量60K的最大可溶性片段，凝胶上没有保留低分子量片段，碳酸氢盐(PCC)氧化产生的碎片在50-200K范围内。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中的附图作详细地介绍，以此让本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

图1为是在SDS-PAGE实验以20%均匀凝胶上的复合处理图。

具体实施方式

为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

本发明提供一种在废羊毛提取角蛋白的方法：包括以下步骤；

A.采用4.0-25.0微米的羊毛纤维，将羊毛在0.1%的TWEEN20溶液中洗涤2h，而后用水冲洗，真空过滤在Whatman#2纸上；