[发明专利]一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法

说明书

本发明属于生物医药技术研发领域，涉及一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，若干份血浆混合后，依次经过混浆50％饱和硫酸铵法粗纯化步骤、粗蛋白超滤步骤、粗蛋白离子交换层析纯化步骤、纯化蛋白超滤步骤、纯化蛋白的缓冲系置换及组分检测步骤，得模拟IVIg制品的多人份混浆高纯高丰度IgG样品，用于其它后续研究步骤使用。样品IgG含量高，IgG谱广泛，亲水性与机体高亲和等，专供IVIg等血浆纯化蛋白制品的制品改良等研究需求使用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法。

背景技术

静注人免疫球蛋白pH4(intravenous immunoglobulins，IVIG)，是一种重要的人血浆蛋白制品，主要成分是免疫球蛋白IgG。

IVIg作为传统的血液制品因其安全有效的特点而得到广泛应用，已经成为传统血液制品之一，其工业化程度很高。但也是受限于其高度的工业化，商业化IVIg制品的可编辑性极低。IVIg长久以来的多项缺陷与短板受工业化的限制而难以对制品采取基础研究所需的针对IVIg编辑优化的相关研究。

如何尽可能保留血浆完整IgG抗体谱的前提下，不丢失IgG抗体的生物学活性并尽量降低纯化产物中杂蛋白的含量，是需要解决的技术问题。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，纯化方法为在实验条件下对现有单一传统蛋白质纯化方法的集成应用，所制备样品IgG高纯高丰度，与IVIg制品高度相似；制备过程易干预，灵活度高，能够满足各种研究目的的实验样本需求，填补IVIg制品研发领域的空缺。

解决以上技术问题的本发明中的一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，其特征在于：若干份血浆混合后，依次经过混浆50％饱和硫酸铵法粗纯化步骤、粗蛋白超滤步骤、粗蛋白离子交换层析纯化步骤、纯化蛋白超滤步骤、纯化蛋白的缓冲系置换及组分检测步骤，得模拟IVIg制品的多人份混浆高纯高丰度IgG样品，用于其它后续研究步骤使用。

本发明中一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，包括以下具体步骤：

步骤一：若干份血浆混合；

步骤二：混浆50％饱和硫酸铵法粗纯化：主要目的在于去除血浆白蛋白、脂质等非IgG成分。

(1)步骤一混浆与饱和度100％的饱和硫酸铵溶液在常温条件下按体积比1：1等体积混合，静置后离心，弃上清取沉淀；

需精确把控混合体积比，尽量去除上清液，这将影响白蛋白的去除效果以及IgG的沉淀效果，操作需尽量温和迅速，否则将影响IgG生物学活性。

(2)沉淀按混浆与重溶粗蛋白体积比1：0.6-1于沉淀中加入适量平衡缓冲液(Start Buffer；SB)后震荡混匀充分溶解沉淀；

(3)上述所得溶液经0.22μm孔径超滤膜超滤后得粗蛋白样品；样品保存于4℃条件或冰上备用；具体为使用0.22μm针头超滤膜(Merck millporeLtd.Tullagreen,Carrigtwohill,Co.cork,IRL.)对重溶沉淀进行超滤后得粗蛋白样品；样品保存于4℃条件或冰上备用；

步骤三：粗蛋白离子交换层析纯化：缓冲体系的pH、精氨酸浓度、盐浓度等因素将影响IgG整体纯度与回收率。

(1)步骤二所得粗蛋白样品通过Hitrap Desalting脱盐层析柱脱盐处理，监视器紫外峰完全通过后可重复上样；