[发明专利]一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法

权利要求书

1.一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，其特征在于：包括以下具体步骤：步骤一：若干份血浆混合；

步骤二：混浆50％饱和硫酸铵法粗纯化：

(1)步骤一混浆与饱和度100％的饱和硫酸铵溶液在常温条件下按体积比1：1混合，静置后离心，弃上清取沉淀；

(2)沉淀中加入平衡缓冲液后震荡混匀充分溶解沉淀；平衡缓冲液体积与原混浆体积比为0.6-1：1；

(3)上述所得溶液经0.22μm孔径超滤膜超滤后得粗蛋白样品；样品保存于4℃条件或冰上备用；

步骤三：粗蛋白离子交换层析纯化：

(1)粗蛋白样品通过脱盐层析柱脱盐处理，监视器紫外峰完全通过后重复上样；

(2)除盐后样品通过离子亲和层析柱结合粗蛋白IgG成分，使用洗脱缓冲液洗脱与填料结合的IgG成分，收集洗脱峰组分，再生液完全通过后可重复上样；

(3)纯化蛋白样品保存于4℃条件或冰上备用；

步骤四：纯化蛋白超滤及缓冲系置换：组分检测后使用离心式超滤器对纯化蛋白样品进行超滤处理，根据所测蛋白浓度复溶至研究需要的蛋白浓度或IgG浓度，即得模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品成品；

所述步骤一和步骤二之间还有若干份血浆混合预处理步骤和混浆去冷沉淀步骤；

所述若干份血浆混合预处理步骤：获取原料血浆，根据研究需求选用任意血浆份数、浆源类型、混浆比例、添加剂种类和数量条件制备成混浆；所述原料血浆为若干份新鲜血浆或冻存期2年以内的冰冻血浆；

所述步骤三的洗脱缓冲液为0.22μm滤膜超滤磷酸盐缓冲液(PB)含0.2-0.8M精氨酸，pH＝7.5-8.5。

2.根据权利要求1所述的一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤二中第(3)步中超滤为用离子交换柱Hitrap Capto MMC离子亲和层析柱5mL×5；所述平衡缓冲液为0.22μm滤膜超滤磷酸盐缓冲液，pH＝6.5，柱温25℃，流速为1.5mL/min。

3.根据权利要求1所述的一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，其特征在于：所述洗脱缓冲液为0.22μm滤膜超滤磷酸盐缓冲液(PB)，含0.5M精氨酸，pH＝8.0。

4.根据权利要求1所述的一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤四中模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG成品分装后于4℃温度条件下1周、-20℃温度条件下1年、-80℃温度条件下10年的条件下避光保存，避免反复冻融。

5.根据权利要求1所述的一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，其特征在于：所述纯化方法中组分检测步骤为样品成品通过BCA、Elisa、Western Blot、Coomassie brilliant blue staining生化实验检测分析其组分，是否含有硫酸铵、精氨酸、枸橼酸抗凝剂或其它成分，有各组份含量多少。

6.根据权利要求1所述的一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法，其特征在于：所述纯化方法中组分检测步骤为使用BCA蛋白浓度测定法测定纯化蛋白样品的总蛋白浓度或通过Elisa法测定IgG浓度。