[发明专利]一种高效快速重编程体细胞为神经干细胞的方法及其应用

权利要求书

1.一种高效快速重编程体细胞为神经干细胞的方法，其特征在于，包括：体细胞的分离、提取和扩增；基因敲降载体或基因敲除载体的转染；神经干细胞的扩增培养；

所述的基因敲降载体或基因敲除载体包括阻断let-7基因的shRNA、siRNA、CRISPR基因编辑载体或相关microRNA抑制剂；

所述的let-7基因为let-7b，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；编码所述的shRNA的DNA序列如SEQ.ID.NO.2所示；

所述的体细胞为成纤维细胞、血液细胞、尿液细胞、上皮细胞、表皮细胞或毛囊细胞；

所述的基因敲降载体或基因敲除载体的转染为：在神经干细胞诱导液的培养下，重编程体细胞为神经干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基因敲降载体或基因敲除载体为慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体或质粒载体所构建形成的shRNA、RNAi、CRISPR基因编辑载体或相关microRNA抑制剂。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的成纤维细胞为人皮肤成纤维细胞、人包皮成纤维细胞、人眼睑成纤维细胞、小鼠胚胎成纤维细胞或小鼠尾尖成纤维细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基因敲降载体或基因敲除载体的转染为：在神经干细胞诱导液的培养下，重编程体细胞为神经干细胞；

重编程过程在 D 型多聚赖氨酸、层粘连蛋白、明胶中的一种或数种的组合包被的盖玻片上进行；

所述的神经干细胞诱导液为含有细胞培养添加剂、碱性成纤维细胞生长因子 bFGF、表皮生长因子 EGF、维生素C、丙戊酸和聚凝胺的DMEM/F12培养基；

所述的细胞培养添加剂为B27细胞培养添加剂和/或N2细胞培养添加剂。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的神经干细胞的扩增培养为在神经干细胞培养液中进行培养2天以上。

6.一种神经干细胞，通过如权利要求1-5任一项所述的方法获得。

7.一种如权利要求6所述的神经干细胞在制备治疗神经细胞病变疾病的药物或制剂中的应用，其特征在于，所述的神经细胞病变疾病为神经退行性疾病，损伤性疾病，基因突变疾病或继发外伤、缺血、溢血导致的神经系统病变。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的神经细胞病变疾病为阿尔兹海默病、帕金森症、肌萎缩性侧索硬化症、多发性硬化、亨廷顿舞蹈病、脊髓损伤、脑中风、脑卒中或自闭症。