[发明专利]一种自然共生的混合培养物及其降解秸秆生产香豆酸酯酶的方法

权利要求书

1.一种自然共生的混合培养物，其特征在于，所述的混合培养物由厌氧真菌(Neocallimastix frontalis)和甲烷菌(Methanobrevibacter gottschalkii)组成，命名为YakQH5，所述的混合培养物YakQH5于2020年3月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19299，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，电话：010-64807355。

2.一种发酵秸秆生产香豆酸酯酶的方法，其特征在于，使用权利要求1所述的混合培养物YakQH5为发酵菌剂；所述的方法包括如下步骤：

(1)混合培养物YakQH5菌剂的制备：以10％v/v接种量向以小麦秸秆为底物的厌氧培养基中接入混合培养物YakQH5，加入复合抗生素厌氧培养即得到高活力的菌剂；

(2)生产香豆酸酯酶：吸取步骤(1)所得菌剂以10％v/v接种量接入以1％w/v秸秆为底物的厌氧培养基中，加入1％v/v复合抗生素厌氧培养；

所述的步骤(1)中厌氧培养的温度为39℃，时间为72小时；所述的步骤(2)中厌氧培养的温度为39℃，时间为5天；所述的步骤(2)中的复合抗生素为青霉素钠和硫酸链霉素，在厌氧培养基中的浓度分别为1600IU/mL和2000IU/mL；

所述的厌氧培养基配方为：酵母膏1.0g，蛋白胨1.0g，NaHCO₃ 7.0g，刃天青1.0g/L1mL，L-半胱氨酸盐酸盐1.7g，晨饲前采集瘤胃液8000×g，4℃离心20min后的上清170mL，盐溶液Ⅰ82.5mL，盐溶液II 16.5mL，蒸馏水定容至1000mL；所述的盐溶液I配制步骤如下：NaCl 6g，(NH₄)₂SO₄ 3g，KH₂PO₄ 3g，CaCl₂·2H₂O 0.4g，MgSO₄·2H₂O 0.6g，蒸馏水定容至1000mL；所述的盐溶液II配制步骤如下：4g K₂HPO₄，蒸馏水定容至1000mL；所述的步骤(2)加入秸秆底物后除氧，充入二氧化碳，高温高压灭菌；所述的步骤(2)加入的秸秆为小麦秸秆、玉米秸秆、水稻秸秆、燕麦秸秆和高粱秸秆的任一种或几种。

3.如权利要求2所述的生产香豆酸酯酶的方法，其特征在于，所述的步骤(2)加入的秸秆为高粱秸秆。