[发明专利]一种牛奶体细胞分离过程优化工艺

说明书

本发明公开了一种牛奶体细胞分离过程优化工艺，涉及牛奶体细胞RNA提取技术领域；包括分离牛奶体细胞沉淀过程和RNA提取过程，所述分离牛奶体细胞沉淀过程，包括如下步骤：使用15mL离心管收集新鲜奶样；每头牛挤出的鲜奶分别装至4个或若干个15ml离心管，1800r/10min/室温离心；弃掉乳清和乳脂；所述RNA提取过程，包括如下步骤：采用AM1561试剂盒；将15ml离心管中的裂解物转移至1.5ml离心管。本发明无需过滤或添加额外的试剂，当场分离牛奶体细胞，大大节省了时间，减少了不必要的操作，节省了时间，简化了操作，使得牛奶体细胞沉淀分离过程，更迅速、简单、方便。

技术领域

本发明涉及牛奶体细胞RNA提取技术领域，尤其涉及一种牛奶体细胞分离过程优化工艺。

背景技术

牛奶中的体细胞有两个来源，一是来自乳腺分泌组织中的上皮细胞，也称腺细胞；二是来自与炎症进行搏斗时而死亡的白血细胞，腺细胞是正常的体细胞，是乳腺进行新陈代谢过程的产物，在奶中的含量相对恒定，而白细胞是一种防卫细胞，可以杀灭感染乳腺的病菌，还可以修复损伤的组织，因此白细胞在牛奶中的数量随奶牛的生理状态和健康水平有很大变化，而牛奶体细胞分离过程优化，是牛奶体细胞RNA提取过程的优化。

经检索，中国专利申请号为CN201510188677.7的专利，公开了一种牛奶体细胞图像分割方法，其包括以下步骤：获取体细胞图像，使用乳液样本和荧光染色剂混合，将其放入特质的载玻片中并用激光照射，由于体细胞染色之后会发出红光，再通过专业高清数码摄像头并进行滤波，使得只有荧光通过，得到基于RGB模型的体细胞图像；利用得到的体细胞图像并分析荧光透过的RGB分量，使用分量法对图像进行灰度化处理，考虑细胞的灰度分布不均匀，仅采用图像的R分量对细胞图像进行灰度处理；对步骤二中得到的灰度图像利用最大类间方差法对牛奶体细胞进行前景和背景的分割，得到二值化图像I；在步骤三中得到的细胞分割图像中会存在细胞的粘连问题，使用基于数学形态学的方法来处理细胞粘连情况，即对分割之后的图像I进行腐蚀操作，最后得到以单个细胞为单连通域的二值化图像。上述专利中的牛奶体细胞图像分割方法存在以下不足：为获得较多的体细胞数量，在早成挤奶后若干小时进行手动挤奶，且采集奶样后需加EDTA、用纱布过滤等操作进行分离体细胞，较为繁琐。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种牛奶体细胞分离过程优化工艺。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种牛奶体细胞分离过程优化工艺，包括分离牛奶体细胞沉淀过程和RNA提取过程。

优选地：所述分离牛奶体细胞沉淀过程，包括如下步骤：

S1：使用15mL离心管收集新鲜奶样；

S2：每头牛挤出的鲜奶分别装至4个或若干个15ml离心管， 1800r/10min/室温离心；

S3：弃掉乳清和乳脂，每管用1-2ml PBS吹打混匀沉淀，此步之后也可全部转移到同一个15mL离心管后再离心；

S4：1500r室温离心5min，弃乳清和乳脂，尽量除去残留乳脂，每管加400μL Trizol裂解液，静置后带回实验室。

优选地：所述S4中Trizol裂解液的主要成分是苯酚，Trizol 在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。

优选地：所述S4中具体操作为，室温静置15分钟后放入干冰，再带回实验室。

优选地：所述RNA提取过程，包括如下步骤：

S11：采用AM1561试剂盒；

S12：将15ml离心管中的裂解物转移至1.5ml离心管；