[发明专利]一种串联式验证DNA编码苗头化合物修饰抗体的方法

说明书

本发明公开了一种串联式验证DNA编码筛选分子修饰抗体功能的方法，对于已获得的分别靶向靶蛋白与醛缩酶抗体的双亲功能分子，通过分子修饰质谱检测实验，蛋白结合验证实验，细胞膜蛋白结合验证实验与免疫组化验证实验，从生物学外源与内源水平提高抗体识别靶点的能力。采用本发明的实验方法，可以准确、灵敏、实时地验证抗体通过双亲功能分子的修饰增强特异鉴定并识别靶蛋白的能力，为双亲功能分子的改造与优化并为后续体内功能实验提供了验证数据与方法支持，为DNA编码化合物广泛应用于双亲功能分子的研发与作用功能的阐明奠定了研究基础，使基于DNA编码化合物来源的靶蛋白分子的筛选、鉴定和验证过程标准化、精确化、数据化、通量化。

技术领域

本发明属于药物筛选领域，具体涉及DNA编码苗头化合物的改造并利用此分子对醛缩酶抗体进行修饰后的验证方法，尤其涉及一种串联式验证DNA编码苗头化合物来源的双亲功能分子修饰抗体的验证方法。

背景技术

DNA编码化合物(DNA encoded Library,DEL)通过DNA序列的连接标记化合物分子砌块的合成，根据组合化学的方式在短时间内即可获得通量化的DNA编码化合物库。聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)与高通量二代测序(Next generationsequencing,NGS)的应用则可以高效推断化合物的分子组成，从检测水平克服了对高灵敏质谱的依赖。因此，DEL正逐渐成为新型苗头化合物发现的重要手段。DEL技术应用的苗头化合物鉴定通过DEL与靶蛋白孵育，洗脱后产物再次与靶蛋白进行孵育，通过多轮的富集得到与靶蛋白亲和力高的DEL分子，之后经过定量，扩增，测序，翻译得到与DNA序列对应的化合物分子信息。数据分析环节则根据化合物富集的程度进行计算，根据富集值与测序鉴定的分子数目作为参考并判断结合DEL分子的亲和力，从而推断出潜在的苗头化合物分子。针对苗头化合物，在确定了其母核结构与生物活性后，一般会通过初步的结构改造与优化形成先导化合物，使得先导化合物在苗头化合物的基础上选择性与生物活性提高，并改善其物化性质与药代毒理性。

抗体作为生物大分子的代表，其功能是帮助宿主细胞识别特异抗原，以抗体-抗原免疫作用达到清除病原体的目的。抗体的产生依赖于B淋巴细胞，在辅助T细胞递呈抗原的状态下，通过其可变区域特异且唯一识别抗原，因此，抗体具有极强的专一性。抗体的工程化改造通常从基因工程或蛋白质工程入手，在DNA层面可优化抗体表达序列，在蛋白质水平则可以通过细胞融合与化学修饰等手段增强抗体的特异性及生物活性。

目前，DEL技术与苗头化合物在生物化学领域的应用正处于起步时期，鲜少有研究报道苗头化合物用以改造抗体类大分子及其功能探究。我们将DEL筛选技术与抗体工程化改造相结合，基于DEL筛选技术得到的潜在苗头化合物分子与醛缩酶抗体识别的二酮分子进行融合，可直接应用于醛缩酶抗体的工程化改造，并通过串联式验证方法用以确定融合的双亲分子的功能。

发明内容

本发明要解决的技术问题是验证醛缩酶抗体通过双亲功能分子改造后是否保留有高度识别靶蛋白的能力，避免了单独构建靶蛋白识别抗体耗时繁琐的流程，同时验证了多样化潜在DNA编码苗头化合物的功能，有效提高了DNA编码苗头化合物的构效关系及成药性的研究，降低DNA编码苗头化合物的改造与优化成本。本发明利用串联式验证方法检验DNA编码苗头化合物来源的双亲功能分子修饰抗体的功能，能够有效地降低阴性结合化合物的干扰，提高双亲功能分子修饰抗体应用的成功率。

为解决现有技术存在的问题，本方法采用串联式验证方法对DNA编码苗头化合物来源的双亲功能分子修饰抗体的功能进行检验并确定，可适用于DEL筛选后苗头化合物用以改造抗体及其功能验证研究。

本发明采用的技术方案是：

一种串联式验证DNA编码苗头化合物分子修饰抗体功能的方法，包括：

针对靶蛋白进行DNA编码化合物库亲和筛选，根据筛选所富集的DNA编码化合物按照其计算值及测序拷贝数由高到低进行排序，确定潜在的DNA编码苗头化合物的分子序列信息及设计去除DNA标签的苗头化合物的合成路径；