[发明专利]一种串联式验证DNA编码苗头化合物修饰抗体的方法

权利要求书

1.一种非疾病诊断治疗目的的串联式验证DNA编码苗头化合物分子修饰抗体功能的方法，其特征在于，

根据基于PD-L1靶蛋白的DNA编码化合物库筛选的结果，通过数据分析根据其富集计算值进行降序排序以得到可信度较高的潜在DNA编码苗头化合物；

合成潜在DNA编码苗头化合物，并将潜在DNA编码苗头化合物与二酮分子通过衔接体连接形成双亲功能分子；

对于已获得的分别靶向PD-L1靶蛋白与醛缩酶抗体的所述双亲功能分子，通过分子修饰质谱检测实验，蛋白结合验证实验，细胞膜蛋白结合验证实验与免疫组化验证实验，从生物学外源与内源水平提高抗体识别靶点的能力，包括：

（1）通过所述分子修饰质谱检测实验来特异鉴定双亲功能分子与醛缩酶抗体的作用方式；

（2）通过所述蛋白结合验证实验来检测PD-L1靶蛋白与醛缩酶抗体通过双亲功能分子产生的相互作用；

（3）通过所述细胞膜蛋白结合验证实验来验证细胞膜表面PD-L1靶蛋白的表达及其通过双亲功能分子偶联醛缩酶抗体能力；

（4）通过双亲功能分子组装抗体的免疫组化验证实验来定位PD-L1靶蛋白的表达。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中具体包括：以100% 二甲基亚砜溶液溶解双亲功能分子配制为双亲功能分子储存液，使得其终浓度为20 mM，以质谱亲和缓冲液梯度稀释双亲功能分子储存液，使得其终浓度为50 μM。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中具体包括：以质谱亲和缓冲液溶解20 μg醛缩酶抗体，并与双亲功能分子溶液等体积混合，37℃孵育一小时；利用凝胶排阻色谱柱过滤孵育溶液，收集洗脱溶液进行质谱检测。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述质谱亲和缓冲液成分为1* PBS Tween20缓冲液，1*PBS, pH 7.4, 0.05% Tween 20，每组样品需用50 µL。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（2）中具体包括：以清洗缓冲液清洗Protein G免疫磁珠三次，弃清洗缓冲液；以结合缓冲液溶解2 μg醛缩酶抗体/组，将两者室温孵育半小时使得醛缩酶抗体包被磁珠，之后弃上清并以结合缓冲液清洗醛缩酶抗体包被磁珠一次，弃上清保留醛缩酶抗体-磁珠包被复合物。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述清洗缓冲液成分为1* TBS Tween 20缓冲液，25 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.05% Tween 20, pH 7.5，每组样品需用600 µL；所述结合缓冲液成分为1* TBS Tween 20缓冲液，25 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.05% Tween20, pH 7.5，每次实验前配制新鲜亲和筛选缓冲液，每组样品需用200 µL。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤（2）中具体包括：以结合缓冲液梯度稀释双亲功能分子储存液，使得其终浓度为10 μM；将稀释的双亲功能分子与醛缩酶抗体-磁珠包被复合物混合，于37℃孵育一小时，之后弃上清并以结合缓冲液清洗孵育后磁珠三次，弃上清保留双亲功能分子-醛缩酶抗体-磁珠包被复合物。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，在步骤（2）中具体包括：以结合缓冲液溶解2μg PD-L1靶蛋白/组，使得其终体积为50 µL，将双亲功能分子-醛缩酶抗体-磁珠包被复合物与PD-L1靶蛋白溶液混合，室温孵育一小时，之后弃上清并以结合缓冲液清洗孵育后磁珠三次，弃上清保留PD-L1靶蛋白-双亲功能分子-醛缩酶抗体-磁珠包被复合物；利用WesternBlot的方式检测PD-L1靶蛋白是否通过双亲功能分子的桥连与醛缩酶抗体发生相互作用。