[发明专利]一种内皮细胞成骨诱导分化培养基及制备方法

说明书

本发明公开一种内皮细胞成骨诱导分化培养基及制备方法，属于培养基技术领域。其化培养基由以下组分制成：α‑MEM培养基、胎牛血清5‑50％体积百分比、Insulin‑Transferrin‑Selenium(ITS‑G)0.1%‑5%体积百分比、bFGF 1‑10ng／ml、EGF 1‑10ng／ml、VEGF 5‑50ng／ml、TGF‑β 5‑50ng／ml浓度、MSCGS 0.1%‑5%体积百分比、丙酮酸钠0.1‑10mM、巯基乙醇0.01‑1mM、Dexamethasone 10‑200nM浓度、Vc 10‑150ug／ml浓度、β‑甘油磷酸钠1‑100mM浓度。本发明的培养基制备方法简便，诱导速度快，过程稳定。

技术领域

本发明涉及培养基技术领域，具体为一种内皮细胞成骨诱导分化培养基及制备方法。

背景技术

目前现有的成骨诱导培养基主要针对的是骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞以及脂肪间充质干细胞在内的多种组织间充质干细胞，但目前还没有直接针对内皮细胞向成骨细胞分化的培养基。目前现有的技术是经过不同的试剂先将内皮细胞向干细胞诱导分化，使内皮细胞具有向成骨细胞分化的干性，然后再通过成骨诱导培养基向成骨细胞分化，该技术具有成本高，周期长，成功率低的的不足，现在经过本发明，可一步实现内皮细胞向成骨细胞分化的特性，更接近于模仿体内异位骨化发生的情况。

发明内容

本发明的目的在于克服现有培养基技术不足，提供一种使用方便、高效的内皮细胞向成骨细胞诱导分化培养基及制备方法。

本发明的目的是这样实现的：

异位骨化谱系示踪表明导致异位骨化的细胞类型来源于内皮细胞，但内皮细胞不具备干细胞特性，目前研究发现血管内皮细胞可以通过激活样激酶-2 (ALK2)受体依赖机制转化为多能干细胞样细胞。（1）在进展性骨化纤维发育不良(FOP)的病变中或表达组成活性ALK2的转基因小鼠的病变中，软骨细胞和成骨细胞表达内皮标记物。（2）使用Tie2-Cre构建的小鼠异位骨化谱系示踪也表明这些细胞类型的内皮来源。（3）组成活性的ALK2在内皮细胞中的表达导致了内皮细胞向间充质细胞的转变，并获得了类似干细胞的表型。（4）用转化生长因子b2 (TGF-b2)或骨形态发生蛋白4 (BMP4)的配体以alk2依赖的方式处理未转染的内皮细胞也得到类似的结果。这些干细胞样细胞可被触发向成骨细胞、软骨细胞或脂肪细胞分化。我们认为内皮细胞向干细胞样细胞的转化可能为组织工程提供一种新的途径，本发明就是在体外通过特殊诱导培养基模拟体内血管内皮细胞向干细胞分化及进一步分化为成骨细胞。

本发明提供了一种内皮细胞成骨诱导分化培养基，由以下组分制成，

α-MEM培养基、胎牛血清5-50％体积百分比、Insulin-Transferrin-Selenium(ITS -G) 0.1%-5%体积百分比、bFGF 1-10ng／ml、EGF 1-10ng／ml、VEGF 5-50ng／ml、TGF-β5-50ng／ml浓度、MSCGS 0.1%-5%体积百分比、丙酮酸钠 0.1-10mM、巯基乙醇0.01-1mM、Dexamethasone 10-200nM浓度、Vc 10-150ug／ml浓度、β-甘油磷酸钠1-100mM浓度、L-谷氨酰胺10-50mM浓度、青链霉素 0.1%-5%体积百分比。

优选地，本发明一种内皮细胞成骨诱导分化培养基由以下组分制成，

α-MEM培养基、胎牛血清20％体积百分比、Insulin-Transferrin-Selenium (ITS-G) 1%体积百分比、bFGF 5ng／ml、EGF 1ng／ml、VEGF 50ng／ml、TGF-β25ng／ml浓度、MSCGS1%体积百分比、丙酮酸钠 0.5mM、巯基乙醇0.05mM、Dexamethasone 80nM浓度、Vc 70ug／ml浓度、β-甘油磷酸钠10mM浓度、L-谷氨酰胺20mM浓度、青链霉素 1%体积百分比。

其中，所述TGF-β为TGF-β2。