[发明专利]一种5-甲基四氢叶酸化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种5‑甲基四氢叶酸化学发光检测试剂盒，包括：第一试剂、第二试剂、第三试剂和第四试剂；其中第一试剂为5‑甲基四氢叶酸‑碱性磷酸酶连接物、第二试剂为抗5‑甲基四氢叶酸抗体‑磁微粒子工作液、第三试剂为清洗缓冲液、第四试剂为酶促发光底物液或直接发光底物液。本试剂盒用于化学发光免疫分析技术全自动检测人体中5‑甲基四氢叶酸的含量。

技术领域

本发明涉及化学发光检测试剂盒技术领域，具体涉及一种5-甲基四氢叶酸化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

叶酸广泛存在于各种食物中，但天然食品所含的叶酸大多数以谷氨酸叶酸的形式存在，含量也不高。随着研究深入，叶酸在膳食中的重要性日益为人们所认知。但真正在人体以活性形式存在的叶酸其实是5-甲基四氢叶酸。5-甲基四氢叶酸是血清中叶酸存在的主要形式，是叶酸参与生理代谢的唯一途径。2013年发表在《PLOS ONE》的文章分析了来自中国10个地区15357名汉族人群叶酸代谢基因突变率。结果显示：MTHFR基因突变型TT（酶活性35%）占总人群的29.8%，这部分人不能将摄入的叶酸（Folic Acid）完全代谢，转化出真正有用的5-甲基四氢叶酸，即使在大量补充合成叶酸后也可能存在因转化酶活低而导致活性叶酸不足。因此，检测人体内5-甲基四氢叶酸的水平，比仅仅检测叶酸，更能精准诊断叶酸缺乏以及指导科学补充维生素。

目前，市面上对于5-甲基四氢叶酸的检测方法主要为实验室分析化学类手段，如EILSA、液相色谱、质谱等方法。但现有的5-甲基四氢叶酸检测方法都有一定的局限性，如检测实验步骤较为复杂、不同检测机构的实验操作标准不一、耗时长、需要配备专用仪器、检测成本较高、不能实现全自动高通量分析等，都不适合大批量临床样品的测定。目前市场上缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的5-甲基四氢叶酸检测试剂，尤其是质量好的全自动化检验试剂。化学发光法是一种基于抗原抗体反应原理的精准、快速、成本低廉且可实现全自动化的检验方法，近年来在医学检验领域和临床诊断方面发挥着越来越重要的作用，但目前上市的叶酸化学发光检测试剂针对的是总叶酸而非活性叶酸。因此，开发一款特异性检测人体内5-甲基四氢叶酸水平的化学发光试剂盒，对于临床上诊断叶酸缺乏症及其精准治疗显得尤为重要。

发明内容

为解决上述问题，本申请提供一种5-甲基四氢叶酸化学发光检测试剂盒，用于化学发光免疫分析技术全自动检测人体中5-甲基四氢叶酸的含量。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

根据第一方面，本发明提供一种5-甲基四氢叶酸化学发光检测试剂盒，包括：第一试剂、第二试剂、第三试剂和第四试剂；

具体地，第一试剂为5-甲基四氢叶酸-碱性磷酸酶连接物或5-甲基四氢叶酸-吖啶酯连接物；

具体地，第二试剂为抗5-甲基四氢叶酸抗体-生物素-链霉亲和素-磁微粒子、抗5-甲基四氢叶酸抗体-Tosyl磁珠工作液、抗5-甲基四氢叶酸抗体-羧基磁珠微粒子工作液中的任意一种；

具体地，第三试剂为清洗缓冲液；

具体地，第四试剂为酶促发光的底物液或直接发光底物液。

根据第二方面，本发明还提供一种5-甲基四氢叶酸化学发光检测试剂盒的制备方法，包括：

一些实施方案中，通过抗5-甲基四氢叶酸抗体与吖啶酯反应制备的抗5-甲基四氢叶酸抗体-吖啶酯连接物作为第一试剂；

一些实施方案中，通过EDC/NHS法制备的5-甲基四氢叶酸-碱性磷酸酶连接物作为第一试剂；

一些实施方案中，通过抗5-甲基四氢叶酸抗体与Tosyl磁珠反应制备抗5-甲基四氢叶酸抗体-Tosyl磁珠工作液作为第二试剂；

一些实施方案中，通过抗5-甲基四氢叶酸抗体与羧基磁珠反应制备5-甲基四氢叶酸抗体-羧基磁珠工作液作为第二试剂；