[发明专利]通过全血提取DNA进行qPCR扩增检测获取BsmI与PvuⅡ位点碱基序列的方法在审
申请号: | 202011596447.1 | 申请日: | 2020-12-29 |
公开(公告)号: | CN112501282A | 公开(公告)日: | 2021-03-16 |
发明(设计)人: | 侯明飞;朱月艳;孙子奎 | 申请(专利权)人: | 上海派森诺医学检验所有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6883 | 分类号: | C12Q1/6883;C12Q1/686;C12Q1/6806;C12N15/11 |
代理公司: | 上海点威知识产权代理有限公司 31326 | 代理人: | 胡志强 |
地址: | 201799 上海*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 通过 提取 dna 进行 qpcr 扩增 检测 获取 bsmi pvu 碱基 序列 方法 | ||
1.一种通过全血提取DNA进行qPCR扩增检测获取BsmI与PvuⅡ位点碱基序列的方法,其特征在于,包括下列步骤:
1)所需DNA样本制备,通过全血提取样本DNA,获得的样本DNA后,置于-20℃~4℃中保存待用;
2)样本DNA的qPCR扩增,取步骤1)中的样品DNA进行稀释,稀释至5~30ng/μL,然后在PCR管中构建反应体系,然后送入PCR扩增仪器中,设定好反应程序进行反应,反应完成后获得目的基因;
3)位点检测,将步骤2)中的目的基因进行检测,获得检测报告。
2.如权利要求1所述的一种通过全血提取DNA进行qPCR扩增检测获取BsmI与PvuⅡ位点碱基序列的方法,其特征在于,所述全血提取样本DNA如下所示:
1-mL Tip头剪去尖头,插移液器上,伸入采血管中反复吹打全血3~4次,沉淀的白细胞充分悬浮,转移全血至EP管中,加MGS裂解液,加蛋白酶K混匀,在60℃的水浴锅中加热10min~15min,混匀次数大于2次;
从水浴锅中取出EP管,将EP管内溶液全部倒入离心吸附柱中,吸附柱放入收集管内,8000rpm,离心1min,取出吸附柱,倒掉收集管中废液;
向吸附柱中加入清洗液8000rpm,离心30s,取出吸附柱,倒掉收集管中废液;
漂洗处理两次,完成后取出吸附柱,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中,12000rpm,离心1min,除去残留的乙醇;
将吸附柱置于新的1.5ml离心管中室温环境干燥2-3min;向吸附柱靠近吸附膜中央悬空滴加60℃的洗脱液ET,12000rpm,离心1-2min,离心管内收集到液体即为样本DNA溶液,盖盖子后轻拨离心管内液体混匀。
3.如权利要求1所述的一种通过全血提取DNA进行qPCR扩增检测获取BsmI与PvuⅡ位点碱基序列的方法,其特征在于:所述漂洗处理为向吸附柱中加入漂洗液Wash,8000rpm,离心30s,取出吸附柱,倒掉收集管中废液。
4.如权利要求1所述的一种通过全血提取DNA进行qPCR扩增检测获取BsmI与PvuⅡ位点碱基序列的方法,其特征在于,所述步骤2)中反应体系如下:
5.如权利要求4所述的一种通过全血提取DNA进行qPCR扩增检测获取BsmI与PvuⅡ位点碱基序列的方法,其特征在于:MGB-TaqMan-FAM在Apa I位点采用FAM6,其余均为FAM。
6.如权利要求5所述的一种通过全血提取DNA进行qPCR扩增检测获取BsmI与PvuⅡ位点碱基序列的方法,其特征在于,所述步骤2)中反应程序如下:
S3至S4进行45次循环。
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