[发明专利]一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法在审

专利信息
申请号: 202011596030.5 申请日: 2020-12-29
公开(公告)号: CN112763619A 公开(公告)日: 2021-05-07
发明(设计)人: 范志鸿 申请(专利权)人: 徐州立兴佳正医药科技有限公司
主分类号: G01N30/02 分类号: G01N30/02
代理公司: 北京淮海知识产权代理事务所(普通合伙) 32205 代理人: 李妮
地址: 221000 江苏省徐州市泉*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 联用 测定 血浆 中氟氢 可的松 浓度 方法
【说明书】:

发明公开了一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法,采用液质联用系统测定,先取待测样本,加入一定量的混合有机溶剂进行萃取,预处理后,经色谱柱分离,用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便,为氟氢可的松的血药浓度测定提供依据;本方法的血浆标准曲线线性范围为0.01~3ng/mL,批内和批间精密度RSD均小于±15%,适合于测定血浆中氟氢可的松的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域,具体涉及一种药物的测定方法,特别涉及一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法。

背景技术

醋酸氟氢可的松用于原发性和继发性肾上腺皮质功能不足导致的艾迪生病和失盐型肾上腺皮质综合症的部分替代疗法。

醋酸氟氢可的松主要为盐皮质激素作用,虽有一定糖皮质激素的活性,但常用剂量无明显糖皮质激素作用。其生理作用与氢化可的松类似,但醋酸氟氢可的松对电解质平衡以及对碳水化合物代谢的作用较氢化可的松明显升高和延长。作为盐皮质激素,醋酸氟氢可的松可作用于肾脏的远端小管,以增强钠离子从管状流体到血浆中的再吸收;且能够增加钾离子和氢离子的尿排泄量。

目前,现有关于氟氢可的松测定方法的速度、精度、灵敏度、选择性均有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法,该方法可提高检测的灵敏度、精度、选择性和速度。

为实现上述目的,本发明提供一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法,血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度,具体方法包括以下步骤:

(1)血浆样本预处理:

血浆以K2EDTA为抗凝剂,以氟氢可的松-d5为内标;于贴有标签的玻璃试管中精密加入500μL的血浆样本,加入5μL的体积比为1:1的甲醇水溶液,混匀后加20μL的0.01ng/μL的内标氟氢可的松-d5溶液,混匀后加入20μL1M氢氧化钠,混匀后再向试管中加入3mL的甲基叔丁基醚,涡旋混合1min,于20℃以3000rpm离心5min,取有机溶液层及标签转移至另一干净试管,于纯净空气流下,35℃蒸发干燥至少15min至试管完全干燥,于试管中回溶200μL有机溶液,有机溶液为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比30:70:0.1混合得到的混合物,涡旋混匀1min后,将试管中的溶液转移至96深孔板中,作为测试样品待检测;

(2)试样测定:

取20μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中,检测样本中氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的色谱峰,并据此计算所述血浆样本中的氟氢可的松浓度。

液相色谱测定条件为:色谱柱为Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18,2.7μm,柱规格为3.0×50mm;色谱柱温为40℃;流动相A为水:1M醋酸铵按照体积比100:0.1混合得到的混合物;流动相B为乙腈:水:1M醋酸铵按照体积比70:30:0.1混合得到的混合物;洗液为甲醇:水按照体积比50:50混合得到的混合物;自动进样器温度为15℃;梯度洗脱,流速为0.6mL/min,进样量为20μL,分析时间3min;

质谱测定条件为:离子源为电喷雾离子源,喷雾电压为5500V,雾化温度为600℃,喷雾气压力为90Psi,辅助加热气压力为90Psi,气帘气压力为20Psi,碰撞气压力为6Psi,氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的去簇电压均为100eV;氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的碰撞室入口电压均为14eV;氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的碰撞电压均为27eV;氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的碰撞室出口电压均为10eV;正离子方式检测;扫描方式为多重反应监测;用于定量分析的离子反应分别为:m/z 381.2→m/z 343.4,其为氟氢可的松;和m/z386.3→m/z 348.3,其为氟氢可的松-d5。

优选的,所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为:

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