[发明专利]一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法

权利要求书

1.一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法，其特征在于：血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以氟氢可的松-d5为内标；于贴有标签的玻璃试管中精密加入500μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加20μL的0.01ng/μL的内标氟氢可的松-d5溶液，混匀后加入20μL 1M氢氧化钠，混匀后再向试管中加入3mL的甲基叔丁基醚，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心5min，取有机溶液层及标签转移至另一干净试管，于纯净空气流下，35℃蒸发干燥至少15min至试管完全干燥，于试管中回溶200μL有机溶液，有机溶液为乙腈：水：1M醋酸铵按照体积比30：70：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀1min后，将试管中的溶液转移至96深孔板中，作为测试样品待检测；

(2)试样测定：

取20μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的氟氢可的松浓度；

液相色谱测定条件为：色谱柱为Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18，2.7μm，柱规格为3.0×50mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：1M醋酸铵按照体积比100：0.1混合得到的混合物；流动相B为乙腈：水：1M醋酸铵按照体积比70：30：0.1混合得到的混合物；洗液为甲醇：水按照体积比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.6mL/min，进样量为20μL，分析时间3min；

质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5500V，雾化温度为600℃，喷雾气压力为90Psi，辅助加热气压力为90Psi，气帘气压力为20Psi，碰撞气压力为6Psi，氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的去簇电压均为100eV；氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的碰撞室入口电压均为14eV；氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的碰撞电压均为27eV；氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的碰撞室出口电压均为10eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z 381.2→m/z 343.4，其为氟氢可的松；和m/z386.3→m/z 348.3，其为氟氢可的松-d5。

2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为：

3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中氟氢可的松浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以氟氢可的松和内标氟氢可的松-d5的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的氟氢可的松的浓度。