[发明专利]一种用于快速检测鸭2型腺病毒和鸭圆环病毒的双重PCR引物组及其检测方法与应用

说明书

本发明公开了一种用于快速检测鸭2型腺病毒和鸭圆环病毒的双重PCR引物组及其检测方法与应用，所述的多重PCR引物组是由用于检测DAdV‑2的引物和用于检测DuCV的引物组成。采用双重PCR引物组快速检测DAdV‑2和DuCV的双重PCR方法，实现了在同一个反应体系中同时扩增两种病毒，减少了操作次数，极大的避免了交叉污染。该方法对DAdV‑2和DuCV的检测与鉴别、疫病监测及流行病学调查等方面具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于禽类病毒检测技术领域。具体涉及一种用于快速检测鸭2型腺病毒和鸭圆环病毒的双重PCR引物组及其检测方法与应用。

背景技术

鸭2型腺病毒(Duck adenovirus 2，DAdV-2)属腺病毒科禽腺病毒属，为线状双链DNA病毒。该病主要发生在20～30日龄鸭，患病鸭主要表现为精神萎靡、沉郁和消瘦，排浅黄白色的粪便。病理变化为肝脏肿大并有白色针尖状坏死点灶，肾脏及脾脏肿大充血，胰腺有白色点状坏死。该病1977年首次在法国的番鸭中流行，2014年奥地利科学家Ana Marek通过高通量测序技术获得该病毒全序列。2015年由陈峰等应用宏基因组学分离、鉴定出国内首株鸭2型腺病毒。目前该病已广泛流行于广东、福建、浙江等水禽养殖密集地区，给养鸭业造成了巨大的经济损失。

鸭圆环病毒(Duckcircovirus，DuCV)是圆环病毒科圆环病毒属新成员，DuCV常呈潜伏感染，并入侵鸭的免疫系统，导致鸭机体的免疫功能下降，对多种条件性病原抵抗性减弱，使其更易遭受其他致病因素的侵袭。而一旦发生混合感染(如鸭流感病毒、鸭腺病毒、鸭大肠杆菌等)，感染鸭机体的死亡率就会大大提升。同时，DuCV还会导致鸭子羽毛凌乱、生长迟缓、体重减轻等症状，所以圆环病毒作为一种重要的病原微生物，对我国养殖业的危害不容忽视。

上述两种病原均为DNA病毒，临床引起症状具有一定的相似性，易发生混合感染，极大的增加临鉴别诊断的难度。而常规的诊断方法，如动物实验、免疫学和病毒分离培养，在临床诊断中存在诊断时间长、敏感性低以及操作繁琐等缺点，在临床中不易于快速诊断上述两种疾病。因此，急需建立一种快速、准确、灵敏的检测方法来诊断和监控上述两种病原，确保养鸭业的健康发展。

PCR是实验室常用检测方法之一，其具有快速、灵敏、成本低、操作简单等优点；该方法不仅能进行快速确定病毒种类，还能检测病毒的早期感染和潜伏感染。但是检测时如果使用扩增单种病毒的引物对待测样品进行鉴别，则可能需要准备多份样品扩增多次才能确定感染的病毒类型，不仅在实际操作中需要增加检测次数，另外还会引起交叉感染。双重PCR是在单一PCR基础上建立起来，其优点在于通过一次PCR的反应，可以同时检测并鉴别两种病原，在临床中具有重要的应用价值。目前国内外尚未报道可同时检测鸭圆环病毒和鸭2型腺病毒的双重PCR检测方法。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种用于快速检测鸭2型腺病毒和鸭圆环病毒的双重PCR引物组及其检测方法与应用。该引物组解决了单一PCR操作繁琐、交叉污染风险高的问题，能够对鸭群中鸭圆环病毒和鸭2型腺病毒进行鉴别诊断，对鸭群中鸭圆环病毒和鸭2型腺病毒流行病学调查及防控提供了可靠的检测手段，具有重要的临床应用价值。

本发明是通过以下技术方案实现的

一种用于快速检测DAdV-2和DuCV的双重PCR引物组，所述的双重PCR引物组由用于检测DAdV-2的引物和用于检测DuCV的引物组成，

用于检测DAdV-2的引物的核苷酸序列为：

上游引物F1：5’-CGATGGAACGACAGTAAA-3’

下游引物R1：5’-AAACGAAAAAGCAAGAGC-3’

用于检测DuCV的引物的核苷酸序列为：

上游引物F2：5’-GTGGTGGGACGGTTACTCGG-3’