[发明专利]核酸筛选结合抗体检测用于癌症检测中的用途及其制备的试剂盒

说明书

本发明涉及核酸筛选结合抗体检测用于癌症检测中的用途及其制备的试剂盒，该用途包括通过核酸检测和抗体联合检测，二者组合使用能够高效的筛选肺癌，具有时间短，成本低，见效快的效果，适用于医学上的快速筛选。

技术领域

本发明涉及检测领域，更具体的涉及核酸筛选结合抗体检测用于癌症检测中的用途及其制备的试剂盒。

背景技术

肺癌是世界上发病率最高的肿瘤之一，占男性肿瘤发病率和死亡率首位，全世界肺癌的死亡率高达85%，严重威胁着患者的生命安全。肺癌早期症状通常较轻微，甚至可无任何不适，而一旦发觉往往是晚期，已错过了最佳的治疗时机，预后多因此不良。虽然随着近年来临床诊断技术与治疗技术不断改进与提高，肺癌诊断和治疗现状有所改善，主要从以下方面进行检测。

CTCs是由原发肿瘤细胞脱落到循环血液中形成，它具有原发性肿瘤的特征，是潜在的生物标志物。CTCs可以作为疗效评测指标。在一项研究中，非小细胞肺癌(NSCLC)放疗前检测了CTCs数量，随着放疗后肿瘤缩小，CTCs数量也减少，表明CTCs可以作为放疗疗效评测指标。CTCs也可作为预后指标。有研究报道，V期的cTcs数量高于Ⅲ期患者，且治疗前较少CTCs的患者治疗后的总生存期和无进展生存期更长，表明CTCs是潜在的预后指标。CTCs作为活的肿瘤细胞实体，可提供突变和药物敏感性分析变化。其细胞的完整性可进行细胞水平的研究，从DNA、RNA、表观遗传学等方面提供信息。

人体的血液中存在血浆游离DNA(cfDNA)，其中携带肿瘤特有突变信息的成为ctDNA。ctDNA来源于坏死的或者凋亡的肿瘤细胞。研究表明，ctDNA可以用来重建肿瘤基因。Qiu等指出，ctDNA是表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态检测中具有高特异性和有效性的生物标志物，ctDNA的分析将是非小细胞肺癌的个性化癌症治疗的一个关键部分。Nie等指出，许多基因的改变，如基因突变、杂合性缺失、微卫星不稳定性和基因甲基化，均可在非小细胞肺癌患者ctDNA中发现。因此这些结果表明ctDNA可以作为一个可行的工具来监测NSCLC。研究表明，ctDNA检测肿瘤变异比CTcs有更高的敏感性。目前ctDNA被CFDA推荐用于晚期NSCLC中血浆EGFR的检测。最近研究表明ctDNA涵盖肿瘤整体突变信息，比局部组织活检更具有恶性整体表现。其携带某种肿瘤特异性突变或其他基因组改变信息，可用于早期筛查，表现为假阳性低，特异性好，可携带肿瘤细胞的体细胞突变。

miRNA是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20~25个核苷酸。成熟的miRNA形成RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。不同的miRNA在不同肺癌类型中起不同的作用。有研究报道，在NSCLC中起到致癌作用的有miR-21、miR-17／92、miR-31、miR-224等，在NSCLC中起到抑癌作用的有let-7、miR34b。miR-25在小细胞肺癌(SCLC)中起致癌作用，在SCLC中起抑癌作用的有miR-34、miR138、miR-126。方楚玲等综述了miRNA对肺癌化疗耐药的调控，提出：miRNA与药物转运相关，如miR-495与顺铂药物敏感性增加有关；miRNA与细胞损伤后自我修复能力有关，如miR-138与ERCCL的mRNA结合导致顺铂敏感性增加；miR—NA调控细胞凋亡相关基因，如miR-135a与APC的mRNA结合，导致紫杉醇耐受¨1；miRNA与上皮细胞间质化有关，如miR200家族。在不同组织、不同发育阶段中miRNA的水平有显著差异，这种miRNA表达模式具有分化的位相性和时序性，提示miRNA有可能作为参与调控基因表达的分子，因而具有重要意义。