[发明专利]一种EBV特异性的细胞毒性T细胞的制备方法有效
| 申请号： | 202011588232.5 | 申请日： | 2020-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN112626015B | 公开（公告）日： | 2022-08-16 |
| 发明（设计）人： | 吕晓菲;张慧慧;谭毅;李想 | 申请（专利权）人： | 山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;C12N5/0781;C12N13/00 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 牛芳 |
| 地址： | 250101 山东省济南市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 ebv 特异性 细胞 毒性 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种EBV特异性的细胞毒性T细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：采用刺激细胞按照不同比例刺激单个核细胞，刺激培养3周，收获细胞；所述刺激细胞为辐照过的EBV转化的B淋巴细胞；
EBV特异性的细胞毒性T细胞的培养液为添加5% CTSTM的AIM VTM培养基，第1周添加50IU/mL的IL-2，第2-3周，添加200IU/mL的IL-2；
所述刺激细胞与单个核细胞的比例每周增加；第0天起，刺激细胞与单个核细胞的比例为1:40，第7天起为1:20，第14天起为1:5，每种比例分别刺激一周。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，培养过程中每3天对半更换细胞培养液，维持细胞密度为3.0×106/mL。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述辐照过的EBV转化的B淋巴细胞为以100Gy辐照剂量、3.0×106/mL细胞辐照密度辐照BLCL细胞获得。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述辐照过的EBV转化的B淋巴细胞的培养密度为5.0×105/mL；培养液为添加20% FBS和1% Gluta Mix的RPMI-1640培养基。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述单个核细胞的来源为脐血或外周血。
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