[发明专利]一种分离测定沙库巴曲钙盐及其异构体的方法

说明书

一种分离测定沙库巴曲钙盐及其异构体的方法，具有以下步骤，1)取沙库巴曲钙盐，加稀释剂溶解，得到浓度为0.1‑10mg/ml的试样溶液；2)取步骤1)得到的试样溶液，加稀释剂稀释50‑1000倍，得到对照溶液；3)分别向高效液相色谱仪进样等体积的试样溶液和对照溶液，采用流动相A和流动相B作为流动相进行梯度洗脱，记录色谱图，完成试样溶液中杂质的分离测定。本发明操作简单、方便，可有效实现沙库巴曲钙盐及其异构体、异构体与异构体之间的分离和测定，从而实现控制沙库巴曲钙盐及其产品质量的目的。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，特别涉及一种分离测定沙库巴曲钙盐及其异构体的方法。

背景技术

沙库巴曲钙盐为诺华开发的NEP抑制剂前体药物，也是实验性药物。其作用机制可阻断威胁负责降低血压的2种多肽，主要用于开发成治疗高血压、心衰的药物。沙库巴曲钙与缬沙坦结合成的LCZ696为首个2型血管紧张素受体(ATⅡ)和脑啡肽酶双重抑制剂，临床疗效显著，并于2015年7月获FDA批准上市，沙库巴曲钙盐作为LCZ696片分子结构中的一个结构片段，也可作为一个单独的药物来看待，因此，对其有关物质建立控制指标，也是质量标准中非常关键的控制项目。沙库巴曲钙盐化学名称为：(2R,4S)-5-联苯-4-基-4-(3-羧基丙酰基氨基)-2-甲基-戊酸乙酯钙盐，化学结构式如式(a)所示。

本品具有2个手性中心，故具有1个对映异构体，简称为杂质AHUA，2个非对映异构体，简称为杂质AHUB、杂质AHUC，其结构式分别如式(b)、(c)、(d)所示。

对于异构体的分离检测，特别是对映异构体，一般采用常规手性柱，利用正向色谱法对其进行分离检测，这种检测方法形成的基线较差，峰形不好，很难达到检测要求。

为了准确地控制沙库巴曲钙的质量，有必要寻找一种能将沙库巴曲钙与其异构体有效分离的HPLC测定方法。这对实现沙库巴曲钙与其异构体的分离在沙库巴曲钙合成和制剂的质量控制中具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种分离测定沙库巴曲钙盐及其异构体的方法，其操作简单、方便，可有效实现沙库巴曲钙盐及其异构体、异构体与异构体之间的分离和测定，从而实现控制沙库巴曲钙盐及其产品质量的目的。

本发明的技术方案是：一种分离测定沙库巴曲钙盐及其异构体的方法，包括以下步骤：

1)制备试样溶液

取沙库巴曲钙盐，加稀释剂溶解，得到浓度为0.1-10mg/ml的试样溶液；

2)制备对照溶液

取步骤1)得到的试样溶液，加稀释剂稀释50-1000倍，得到对照溶液；

3)分别向高效液相色谱仪进样等体积的步骤1)的试样溶液、步骤2)的对照溶液，进样量为5μl-100μl，

采用流动相A和流动相B作为流动相进行梯度洗脱，流动相的流速为0.4-0.8ml/min，利用200nm至280nm波长检测，记录色谱图，完成试样溶液中异构体的分离测定，