[发明专利]一种分离测定沙库巴曲钙盐及其异构体的方法

权利要求书

1.一种分离测定沙库巴曲钙盐及其异构体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备试样溶液

取沙库巴曲钙盐，加稀释剂溶解，得到浓度为0.1-10mg/ml的试样溶液；

2)制备对照溶液

取步骤1)得到的试样溶液，加稀释剂稀释50-1000倍，得到对照溶液；

3)分别向高效液相色谱仪进样等体积的步骤1)的试样溶液、步骤2)的对照溶液，进样量为5μl-100μl，

采用流动相A和流动相B作为流动相进行梯度洗脱，流动相的流速为0.4-0.8ml/min，利用200nm至280nm波长检测，记录色谱图，完成试样溶液中异构体的分离测定，

其中，高效液相色谱仪采用多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱或者纤维素衍生物反相涂敷型手性色谱柱，所述流动相A为体积浓度是0.0001-1.0％的缓冲溶液，流动相B为乙腈-甲醇混合液，乙腈、甲醇的体积比为75-85：25-15，100体积份的流动相B中添加有0-1体积份的磷酸，流动相采用梯度洗脱方式进入色谱柱，0分钟，流动相A的体积百分数为65％-75％，流动相B的体积百分数为35％-25％；0分钟至50分钟，流动相A的体积百分数线性减少至55％-45％，流动相B的体积分数线性增加至45％-55％；50分钟至50.1分钟，流动相A的体积分数线性增加至65％-75％，流动相B的体积分数线性减少至35％-25％；50.1分钟至60分钟，流动相A的体积分数为65％-75％，流动相B为35％-25％。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)、步骤2)所述稀释剂，为甲醇和水的混合溶液，甲醇和水的体积比为75-95：25-5。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，甲醇和水的体积比为80：20。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述缓冲溶液的体积浓度为0.001-0.2％。

5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸溶液和/或磷酸盐溶液，所述磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二铵中的任一种或几种混合。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述多糖衍生物为直链淀粉；所述纤维素衍生物为纤维素-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯、纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)流动相采用梯度洗脱方式进入色谱柱，0分钟，流动相A的体积百分数为70％，流动相B的体积百分数为30％；0分钟至50分钟，流动相A的体积百分数线性减少至50％，流动相B的体积百分数线性增加至50％；50分钟至50.1分钟，流动相A的体积百分数线性增加至70％，流动相B的体积百分数线性减少至30％；50.1分钟至60分钟，流动相A的体积百分数为70％，流动相B的体积百分数为30％。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述进样量为10μl，利用255nm波长检测，色谱柱的柱温为15-40℃。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，色谱柱的柱温为30℃。