[发明专利]一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的核磁共振方法有效

专利信息
申请号: 202011577753.0 申请日: 2020-12-28
公开(公告)号: CN112630250B 公开(公告)日: 2022-06-17
发明(设计)人: 王申林;赵晓丽;钱朝晖;欧秀元;邹梦冰;马常兴 申请(专利权)人: 北京大学;中国医学科学院病原生物学研究所
主分类号: G01N24/08 分类号: G01N24/08
代理公司: 北京高沃律师事务所 11569 代理人: 吕纪涛
地址: 100871*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 检测 融合 蛋白 脂质体 定位 核磁共振 方法
【权利要求书】:

1.一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的核磁共振方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)对膜融合蛋白进行15N标记,得到标记蛋白,将所述标记蛋白与脂质体反应,得到蛋白-脂质体复合物;

2)对所述步骤1)得到的蛋白-脂质体复合物进行固体核磁共振,采集一维1H-15N固体核磁图谱,根据一维1H-15N固体核磁图谱,分析膜融合蛋白在脂质体中的定位;所述分析膜融合蛋白在脂质体中的定位的方法为:通过对比顺磁和非顺磁脂质体上蛋白质信号的变化,判断膜融合蛋白在脂质体中的定位;

所述脂质体中含有非顺磁磷脂和顺磁磷脂。

2.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,利用600MHz Bruker Avance III固体核磁共振仪进行固体核磁共振,魔角转速设置为10kHz。

3.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述膜融合蛋白包括PSI蛋白。

4.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述脂质体中磷脂的质量百分含量为50~90%。

5.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述脂质体中顺磁磷脂的质量百分含量为0.5~10%。

6.根据权利要求1或5所述的核磁共振方法,其特征在于,所述顺磁磷脂为Gd3+-DMPE-DTPA。

7.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)标记蛋白与脂质体的摩尔比为1:5~1:35。

8.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)反应的条件包括:所述反应的时间为8~60min,所述反应的温度为4~37℃。

9.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)膜融合蛋白的纯度在90%以上。

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