[发明专利]一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的核磁共振方法有效
| 申请号: | 202011577753.0 | 申请日: | 2020-12-28 |
| 公开(公告)号: | CN112630250B | 公开(公告)日: | 2022-06-17 |
| 发明(设计)人: | 王申林;赵晓丽;钱朝晖;欧秀元;邹梦冰;马常兴 | 申请(专利权)人: | 北京大学;中国医学科学院病原生物学研究所 |
| 主分类号: | G01N24/08 | 分类号: | G01N24/08 |
| 代理公司: | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人: | 吕纪涛 |
| 地址: | 100871*** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 检测 融合 蛋白 脂质体 定位 核磁共振 方法 | ||
1.一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的核磁共振方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)对膜融合蛋白进行15N标记,得到标记蛋白,将所述标记蛋白与脂质体反应,得到蛋白-脂质体复合物;
2)对所述步骤1)得到的蛋白-脂质体复合物进行固体核磁共振,采集一维1H-15N固体核磁图谱,根据一维1H-15N固体核磁图谱,分析膜融合蛋白在脂质体中的定位;所述分析膜融合蛋白在脂质体中的定位的方法为:通过对比顺磁和非顺磁脂质体上蛋白质信号的变化,判断膜融合蛋白在脂质体中的定位;
所述脂质体中含有非顺磁磷脂和顺磁磷脂。
2.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,利用600MHz Bruker Avance III固体核磁共振仪进行固体核磁共振,魔角转速设置为10kHz。
3.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述膜融合蛋白包括PSI蛋白。
4.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述脂质体中磷脂的质量百分含量为50~90%。
5.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述脂质体中顺磁磷脂的质量百分含量为0.5~10%。
6.根据权利要求1或5所述的核磁共振方法,其特征在于,所述顺磁磷脂为Gd3+-DMPE-DTPA。
7.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)标记蛋白与脂质体的摩尔比为1:5~1:35。
8.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)反应的条件包括:所述反应的时间为8~60min,所述反应的温度为4~37℃。
9.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)膜融合蛋白的纯度在90%以上。
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