[发明专利]牛血清白蛋白的制备方法

权利要求书

1.牛血清白蛋白的制备方法，其特征在于：包括：

血清稀释：将牛血清或牛血浆稀释至蛋白浓度为40～45mg/ml；

第一步提取：在稀释后的血清中加入辛酸钠至质量分数为3.5‰～4‰，边加入边搅拌，然后调节pH值至5.8～6.8，加热至65～70℃保温4h，冷却至室温放置12～16h，然后分离上清液A；

第二步提取：在上清液A中加入辛酸钠至质量分数为2‰～2.5‰，边加入边搅拌；然后调节pH值至5.0～5.5，加热65～70℃保温2h，冷却至室温放置12～16h，然后分离上清液B；

洗滤浓缩：调节上清液B的pH值至7.0～7.5，过滤、浓缩至蛋白浓度为150～180mg/ml后，经冷冻干燥获得牛血清白蛋白。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述血清稀释步骤中：所述牛血清或牛血浆为成年牛的血清或血浆；所述稀释液采用经0.22μm过滤的纯化水。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一步提取为，

在稀释后的血清中加入辛酸钠至质量分数为3.75‰～3.8‰，边加入边100rpm搅拌；然后调节pH值至6.25～6.60，加热至68～70℃，200rpm搅拌、保温4h；冷却至室温放置13～15h，10000rpm离心分离上清液A。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述第一步提取为，

在稀释后的血清中加入辛酸钠至质量分数为3.8‰，边加入边100rpm搅拌；然后调节pH值至6.25，加热至68℃，200rpm搅拌、保温4h；冷却至室温放置13h，10000rpm离心分离上清液A；

或在稀释后的血清中加入辛酸钠至质量分数为3.75‰，边加入边100rpm搅拌；然后调节pH值至6.35，加热至69.8℃，200rpm搅拌、保温4h；冷却至室温放置15h，10000rpm离心分离上清液A；

或在稀释后的血清中加入辛酸钠至质量分数为3.8‰，边加入边100rpm搅拌；然后调节pH值至6.60，加热至68℃，200rpm搅拌、保温4h；冷却至室温放置15h，10000rpm离心分离上清液A。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二步提取中，

在上清液A中加入辛酸钠至质量分数为2.1‰～2.2‰，边加入边100rpm搅拌；然后调节pH值至5.15～5.65，加热至68.5～69.5℃保温2h，冷却至室温放置12～13.5h，10000rpm离心分离上清液B。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述第二步提取中，

在上清液A中加入辛酸钠至质量分数为2.2‰，边加入边100rpm搅拌；然后调节pH值至5.15，加热至69.5℃，200rpm搅拌、保温2h，冷却至室温放置12h，10000rpm离心分离上清液B；

或在上清液A中加入辛酸钠至质量分数为2.1‰，边加入边100rpm搅拌；然后调节pH值至5.35，加热至69℃，200rpm搅拌、保温2h，冷却至室温放置13h，10000rpm离心分离上清液B；

或在上清液A中加入辛酸钠至质量分数为2.15‰，边加入边100rpm搅拌；然后调节pH值至5.65，加热至68.5℃，200rpm搅拌、保温2h，冷却至室温放置13.5h，10000rpm离心分离上清液B。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述洗滤浓缩步骤中，调节上清液B的pH值至7.25～7.40，经过滤、浓缩至蛋白浓度为165～172mg/ml。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述洗滤浓缩步骤为，

调节上清液B的pH值至7.40，经0.22μm过滤、10kDa超滤浓缩至蛋白浓度为166mg/ml；

或调节上清液B的pH值至7.25，经0.22μm过滤、10kDa超滤浓缩至蛋白浓度为165mg/ml；

或调节上清液B的pH值至7.35，经0.22μm过滤、10kDa超滤浓缩至蛋白浓度为172mg/ml。