[发明专利]一种检测试纸及制备方法与其在检测端粒酶活性中的应用

说明书

本发明提供了一种检测试纸及制备方法与其在检测端粒酶活性中的应用，包括依次连接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜，所述结合垫负载DNA‑金纳米探针，所述硝酸纤维素膜设置测试区，所述测试区内固定测试区序列；所述DNA‑金纳米探针包括探针DNA和金纳米粒子，探针DNA的一端与金纳米粒子连接，所述探针DNA能够与端粒酶底物DNA杂交；所述测试区序列是能够与端粒酶底物DNA催化延伸的序列进行杂交的DNA。本发明提供的试纸对端粒酶延伸产物响应灵敏迅速，能够实现端粒酶活性的可视化检测。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种检测试纸及制备方法与其在检测端粒酶活性中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

端粒酶是由细胞内端粒酶RNA和端粒酶逆转录酶组成的核糖核蛋白，能以自身RNA片段为模板，在逆转录酶作用下，将DNA重复序列(TTAGGG)_n添加到染色体末端的端粒上。正常体细胞中的端粒酶活性处于抑制状态，随细胞分裂端粒逐渐缩短，当端粒缩短至临界长度时，细胞停止分裂，进入衰老阶段直至凋亡。端粒酶活性的激活导致端粒的持续延伸，补偿端粒自然缩短，维持细胞复制循环中的端粒长度，从而避开端粒长度主导的细胞凋亡途径，维系细胞的持续分裂和长期存活。几乎所有种类的原发性肿瘤细胞端粒酶活性表达活跃，其与癌变发生和肿瘤细胞的永生化密切相关。同时，端粒酶活性的过度表达在转移的肿瘤组织中也被检测到，表明其能够指示肿瘤的发展。于此，端粒酶被认为是癌症诊断和预后评估中的重要标志物。

基于端粒酶对端粒酶底物DNA的催化延伸作用，可对端粒酶进行特异性识别进而实现端粒酶活性的检测。早期方法包括底物延伸测定法⁶和端粒重复序列扩增法，通过对端粒酶底物DNA的延伸片段进行凝胶电泳表征从而评估端粒酶活性。为避免其中的放射性/诱变性危害和因聚合酶链式反应产生的结果假象等问题，相继发展了电化学法、荧光法、表面等离子体共振法、表面增强拉曼法等方法。这些方法能够灵敏、准确地进行端粒酶活性的定量分析，但需要专业人员依靠仪器测试完成，提高了对检测人员的要求，特定仪器的使用也不便于方法的推广。发明人研究发现，比色法虽然能够在一定程度上减小对仪器的依赖，但往往需要在有色溶液中观察另一种颜色的产生，在目标物浓度较低时的微弱颜色变化的限制了其灵敏度的提高；同时在溶液相中进行的显色反应不便于进行定点快速分析，显色结果亦不适于长期保存。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供一种检测试纸及制备方法与其在检测端粒酶活性中的应用，本发明提供的试纸对端粒酶延伸产物响应灵敏迅速，能够实现端粒酶活性的可视化检测。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

一方面，一种检测试纸，包括依次连接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜，所述结合垫负载DNA-金纳米探针，所述硝酸纤维素膜设置测试区，所述测试区内固定测试区序列；

所述DNA-金纳米探针包括探针DNA和金纳米粒子，探针DNA的一端与金纳米粒子连接，所述探针DNA能够与端粒酶底物DNA杂交；

所述测试区序列是能够与端粒酶底物DNA催化延伸的序列进行杂交的DNA。

另一方面，一种上述检测试纸的制备方法，包括如下步骤：

提供巯基化的探针DNA，将金纳米粒子与巯基化的探针DNA通过孵育连接获得DNA-金纳米探针，向结合垫喷涂使DNA-金纳米探针的溶液；

提供生物素化的测试区序列，将生物素化的测试区序列与链霉亲和素孵育制备链霉亲和素-生物素化的测试区序列，将链霉亲和素-生物素化的测试区序列喷涂至硝酸纤维素膜的测试区；

将样品垫、喷涂使DNA-金纳米探针的结合垫、喷涂链霉亲和素-生物素化的测试区序列的硝酸纤维素膜依次连接获得。