[发明专利]一种检测试纸及制备方法与其在检测端粒酶活性中的应用

权利要求书

1.一种检测试纸，其特征是，包括依次连接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜，所述结合垫负载DNA-金纳米探针，所述硝酸纤维素膜设置测试区，所述测试区内固定测试区序列；

所述DNA-金纳米探针包括探针DNA和金纳米粒子，探针DNA的一端与金纳米粒子连接，所述探针DNA能够与端粒酶底物DNA杂交；

所述测试区序列是能够与端粒酶底物DNA催化延伸的序列进行杂交的DNA。

2.如权利要求1所述的检测试纸，其特征是，金纳米粒子与探针DNA通过金-巯键结合的方式连接；

或，金纳米粒子表面连接44～48条探针DNA。

3.如权利要求1所述的检测试纸，其特征是，结合垫负载蔗糖；

或，样品垫内含有聚乙烯吡咯烷酮。

4.如权利要求1所述的检测试纸，其特征是，测试区序列通过链霉亲和素-生物素与硝酸纤维素膜配合的方式固定在硝酸纤维素膜的测试区；

或，所述硝酸纤维素膜设置空白区，空白区固定空白区序列，端粒酶底物DNA能够同时与探针DNA和空白区序列杂交。

5.如权利要求1所述的检测试纸，其特征是，样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜的连接处有重叠；

或，包括吸收垫，样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次连接；

或，包括底板，样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜均设置在底板上。

6.一种权利要求1所述的检测试纸的制备方法，其特征是，包括如下步骤：

提供巯基化的探针DNA，将金纳米粒子与巯基化的探针DNA通过孵育连接获得DNA-金纳米探针，向结合垫喷涂使DNA-金纳米探针的溶液；

提供生物素化的测试区序列，将生物素化的测试区序列与链霉亲和素孵育制备链霉亲和素-生物素化的测试区序列，将链霉亲和素-生物素化的测试区序列喷涂至硝酸纤维素膜的测试区；

将样品垫、喷涂使DNA-金纳米探针的结合垫、喷涂链霉亲和素-生物素化的测试区序列的硝酸纤维素膜依次连接获得。

7.如权利要求6所述的检测试纸的制备方法，其特征是，喷涂使DNA-金纳米探针的溶液的量为1.6～2.4μL/cm，DNA-金纳米探针的溶液中金纳米粒子的浓度为10.4～10.6nM；

或，DNA-金纳米探针的溶液中含有质量分数为9.5～10.5％的蔗糖；

或，样品垫在玻纤溶液中进行浸泡并烘干；

优选地，玻纤溶液中含有聚乙烯吡咯烷酮；进一步优选地，聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为1.4～1.6％。

8.一种权利要求1所述的检测试纸在检测端粒酶活性和/或可视化检测肿瘤细胞中的应用。

9.一种端粒酶活性检测试剂盒，其特征是，包括端粒酶底物DNA、权利要求1所述的检测试纸、缓冲液。

10.一种端粒酶活性检测方法，其特征是，将待检测端粒酶活性的样品溶液与端粒酶底物DNA溶液混合孵育获得检测溶液，将检测溶液滴加至权利要求1所述的检测试纸的样品垫，观测所述检测试纸的测试区的颜色。