[发明专利]一种快速扩增体外NK细胞的方法

权利要求书

1.一种扩增NK细胞的方法，其特征在于，包括：

分离纯化NK细胞；

构建含有I53-50a和I53-50B蛋白的纳米颗粒；和

将含有I53-50a和I53-50B蛋白的纳米颗粒加入NK细胞的培养基质；

构建含有I53-50a和I53-50B蛋白的纳米颗粒包括如下步骤：

S1，获得I53-50a、I53-50B、IL-15和4-1BBL的核酸分子；

S2，使IL-15与I53-50a、I53-50B中任意一个连接，4-1BBL与I53-50a、I53-50B中的另一个连接，连接使用连接物；

S3，将与IL-15或4-1BBL连接的I53-50a的基因表达产物和与IL-15或4-1BBL连接的I53-50B的基因表达产物混合，待其自组装形成纳米颗粒；

I53-50a的氨基酸序列为：SEQ ID NO 4的第174-390位；

I53-50B的氨基酸序列为：SEQ ID NO 8。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的NK细胞分离自外周血，为CD16+、CD56+、CD3-细胞。

3.一种构建如权利要求1所述纳米颗粒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，获得I53-50a、I53-50B、IL-15或4-1BBL的核酸分子；

S2，使IL-15与I53-50a、I53-50B中任意一个连接，4-1BBL与I53-50a、I53-50B中的另一个连接，连接使用连接物；

S3，将与IL-15或4-1BBL连接的I53-50a的基因表达产物和与IL-15或4-1BBL连接的I53-50B的基因表达产物混合，待其自组装形成纳米颗粒；

I53-50a的氨基酸序列为：SEQ ID NO 4的第174-390位；

I53-50B的氨基酸序列为：SEQ ID NO 8。

4.一种纳米颗粒，根据权利要求3所述构建方法得到。

5.一种扩增NK细胞的试剂的应用，其特征在于，所述的试剂中含有： I53-50a、I53-50B、IL-15、4-1BBL蛋白的核酸分子；

I53-50a的氨基酸序列为：SEQ ID NO 4的第174-390位；

I53-50B的氨基酸序列为：SEQ ID NO 8；

所述的试剂用于NK细胞的体外扩增，包括以下步骤：

（1） 获得下列组合中的任意一种：

IL-15-I53-50A、I53-50B-4-1BBL蛋白，

I53-50A-4-1BBL、IL-15-I53-50B蛋白；

（2）将步骤（1）获得的蛋白组合混合后，充分混匀或者搅拌，使含有I53-50A和I53-50B蛋白的物质自组装形成纳米颗粒;

（3）去除未偶联的蛋白；

（4）将纳米颗粒加入NK细胞的培养基质； NK细胞的接种密度为10⁴-5×10⁶ 个/ml；

（5）NK细胞的培养时间为3-14天。