[发明专利]一种文拉法辛衍生物、免疫原、抗文拉法辛特异性抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种文拉法辛衍生物，其特征在于，其结构式如式Ⅰ所示：

式Ⅰ。

2.一种如权利要求1所述的文拉法辛衍生物的合成方法，其特征在于，所述合成方法如下式所示：

。

3.一种文拉法辛免疫原，其特征在于，所述文拉法辛免疫原由权利要求1所述的文拉法辛衍生物与载体蛋白连接而成，其结构式如式Ⅱ所示：

式Ⅱ；

其中，载体蛋白为重组鸡卵清白蛋白。

4.根据权利要求3所述的文拉法辛免疫原，其特征在于，所述重组鸡卵清白蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。

5.一种如权利要求3-4任一项所述的文拉法辛免疫原的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

（B1）载体蛋白溶液的制备：将权利要求3-4任一项中所述的重组鸡卵清白蛋白溶解于磷酸盐缓冲液中，得到载体蛋白溶液；

（B2）文拉法辛衍生物溶液的制备：将权利要求1所述的文拉法辛衍生物与二甲基甲酰胺、乙醇、磷酸钾缓冲液、1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺混合，搅拌溶解，得到文拉法辛衍生物溶液；

（B3）文拉法辛免疫原的合成：将步骤（B2）得到的文拉法辛衍生物溶液加入到步骤（B1）得到的载体蛋白溶液中，搅拌反应，经透析纯化，得到文拉法辛免疫原。

6.一种抗文拉法辛特异性抗体，其特征在于，所述抗文拉法辛特异性抗体为使用权利要求3-4任一项所述的文拉法辛免疫原对实验动物进行注射后所得到的特异性抗体，所述的实验动物为兔子、山羊、绵羊、小鼠、大鼠、豚鼠或马中的一种。

7.一种如权利要求6所述的抗文拉法辛特异性抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含以下步骤：

（C1）将权利要求3-4任一项所述的文拉法辛免疫原用磷酸盐缓冲液稀释，得到文拉法辛人工抗原溶液，然后将文拉法辛人工抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对权利要求6中所述的实验动物进行多点注射；

（C2）3-6周后，再用相同的文拉法辛人工抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物进行多点注射，之后每隔3-6周注射一次，共计注射3-10次；

（C3）对步骤（C2）中完成注射的实验动物取血，分离纯化，得到抗文拉法辛特异性抗体。

8.如权利要求6-7任一项所述的抗文拉法辛特异性抗体的应用，其特征在于，将所述抗文拉法辛特异性抗体用于制备文拉法辛检测试剂，所述文拉法辛检测试剂包括文拉法辛均相酶免疫检测试剂与文拉法辛胶乳增强免疫比浊检测试剂。

9.根据权利要求8所述的抗文拉法辛特异性抗体的应用，其特征在于，所述文拉法辛均相酶免疫检测试剂，由R1试剂与R2试剂组成，所述R1试剂包含权利要求6-7任一项所述的抗文拉法辛特异性抗体与R1缓冲液，所述R2试剂包含文拉法辛葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物与R2缓冲液；

所述的R1缓冲液含有酶底物、辅酶、牛血清白蛋白及Tris缓冲液，所述的酶底物为葡萄糖-6-磷酸，所述的辅酶为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；

所述的文拉法辛葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物由权利要求1所述的文拉法辛衍生物与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联而成；其结构式如式Ⅲ所示：

式Ⅲ；

所述的R2缓冲液为含有牛血清白蛋白的Tris缓冲液。

10.根据权利要求8所述的抗文拉法辛特异性抗体的应用，其特征在于，所述文拉法辛胶乳增强免疫比浊检测试剂，由L1试剂与L2试剂组成；

所述L1试剂由权利要求6-7任一项所述的抗文拉法辛特异性抗体、pH=8.0的缓冲液、牛血清白蛋白、氯化钠、吐温-20、丙三醇、乙二胺四乙酸、促凝剂以及防腐剂组成；

所述L2试剂由文拉法辛-牛血清白蛋白复合体包被的聚苯乙烯胶乳颗粒、pH=8.0的缓冲液、牛血清白蛋白、氯化钠、吐温-20、丙三醇、乙二胺四乙酸以及防腐剂组成；

所述的文拉法辛-牛血清白蛋白复合体由权利要求1所述的文拉法辛衍生物与牛血清白蛋白偶联而成，其结构式如式Ⅳ所示：

式Ⅳ；

所述的聚苯乙烯胶乳颗粒直径范围为50-250nm；

所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、MES缓冲液、硼酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液或巴比妥缓冲液中的一种；

所述促凝剂为PEG-4000、PEG-6000、PEG-8000或硫酸葡聚糖钠中的一种；

所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、苯酚或乙基汞硫代硫酸钠中的一种。