[发明专利]本氏烟NbSMG7基因在调控植物抗病毒中的应用及转基因植物培育方法

说明书

本发明公开了一种本氏烟NbSMG7基因在调控植物抗病毒中的应用及转基因植物培育方法，所述病毒为黄瓜绿斑驳花叶病毒，NbSMG7基因的转录本序列如SEQ ID NO:1所示。本发明通过克隆本氏烟中NbSMG7基因，将其构建为带有荧光标签的YFP‑NbSMG7载体，将YFP‑NbSMG7载体转入农杆菌后侵染烟草进行烟草的遗传转化，获得YFP‑NbSMG7转基因植物。获得的本氏烟过表达YFP‑NbSMG7植物能够显著阻碍黄瓜绿斑驳花叶病毒的侵染。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种可稳定遗传的、抗黄瓜绿斑驳花叶病毒的NbSMG7转基因植物的培育方法。

背景技术

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)属帚状病毒科(Virgaviridae)烟草花叶病毒属(Tobamovirus)，可以侵染黄瓜、葫芦、甜瓜、西瓜等葫芦科作物，造成植株生长迟缓、叶片褪绿斑驳、果实变色和纤维化，导致严重损失，是我国重要的植物检疫性有害生物。

CGMMV是正义单链RNA病毒，全长约6400nt，编码4个蛋白，分别为129kD的复制酶、186kD的复制相关蛋白、29kD运动蛋白和17.4kD的外壳蛋白。

CGMMV对葫芦科作物上的危害是世界性难题，目前没有有效的化学药剂可防治CGMMV。通过保守的方法可以在一定程度上减轻CGMMV的为害，如使用消毒种子、通过改进栽培技术培育健壮植株、田间及时铲除发病单株、利用杀虫剂切断病毒的传播载体等。但是现阶段仍未有针对CGMMV有防治效果的药剂及抗病植株被开发出来，且已有研究表明种子处理措施效率不高且不稳定。另外，嫁接技术一直以来是葫芦科作物在生产中普遍应用的农事操作技术，也是防治病虫害的有力措施之一，然而有报道称CGMMV可从西瓜砧木中运输到其接穗中，从而使得CGMMV通过嫁接传播而潜在地成为田间的初侵染来源。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种本氏烟NbSMG7基因在调控植物抗病毒中的应用。

本发明的第二目的是提供一种本氏烟NbSMG7高表达植物的培育方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案具体如下：

本氏烟NbSMG7基因在调控植物抗病毒中的应用，其中，所述病毒为黄瓜绿斑驳花叶病毒。

具体的，通过克隆本氏烟中NbSMG7基因，将其构建为带有荧光标签的YFP-NbSMG7载体，将YFP-NbSMG7载体转入农杆菌后侵染烟草进行烟草的遗传转化，获得的本氏烟过表达YFP-NbSMG7植物能够显著阻碍黄瓜绿斑驳花叶病毒的侵染。

其中，所述NbSMG7的转录本序列如SEQ ID NO:1所示。

一种抗黄瓜绿斑驳花叶病毒的NbSMG7转基因植物的培育方法：通过农杆菌转化的方法，将NbSMG7基因导入目的植物中，获得本氏烟NbSMG7高表达的转基因植物。

具体包括以下步骤：

(1)获得本氏烟植株，用Trizol法从本氏烟植株叶片中提取RNA，去除RNA样品中基因组DNA，并反转录得到cDNA；

(2)利用引物对NbSMG7-F和NbSMG7-R，如SEQ ID NO:2-3所示，以cDNA为模板进行PCR扩增，所使用的引物序列为：

NbSMG7-F：atgatgaccattccaatgga，

NbSMG7-R：cacaaacaaacggccttc；

(3)将扩增产物构建到n-YFP载体上，获得YFP-NbSMG7重组质粒；