[发明专利]本氏烟NbSMG7基因在调控植物抗病毒中的应用及转基因植物培育方法

权利要求书

1.本氏烟NbSMG7基因在调控植物抗病毒中的应用，其特征在于：所述病毒为黄瓜绿斑驳花叶病毒；所述NbSMG7的转录本序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的本氏烟NbSMG7基因在调控植物抗病毒中的应用，其特征在于：通过克隆本氏烟中NbSMG7基因，将其构建为带有荧光标签的YFP-NbSMG7载体，将YFP-NbSMG7载体转入农杆菌后侵染烟草进行烟草的遗传转化，获得的本氏烟过表达YFP-NbSMG7植物能够显著阻碍黄瓜绿斑驳花叶病毒的侵染。

3.一种抗黄瓜绿斑驳花叶病毒的NbSMG7转基因植物的培育方法，其特征在于：通过农杆菌转化的方法，将NbSMG7基因导入目的植物中，获得本氏烟NbSMG7高表达的转基因植物；所述NbSMG7的转录本序列如SEQ ID NO:1所示。

4.根据权利要求3所述的NbSMG7转基因植物的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）获得本氏烟植株，用Trizol法从本氏烟植株叶片中提取RNA，去除RNA样品中基因组DNA，并反转录得到cDNA；

（2）利用引物对NbSMG7-F和NbSMG7-R，如SEQ ID NO:2-3所示，以cDNA为模板进行PCR扩增，所使用的引物序列为：

NbSMG7-F：atgatgaccattccaatgga，

NbSMG7-R：cacaaacaaacggccttc；

（3）将扩增产物构建到n-YFP载体上，获得YFP-NbSMG7重组质粒；

（4）将1 μl重组质粒与100 μl农杆菌感受态混合转入电击杯中，使用电击装置2500 V电击转化，加入LB培养基培养2小时恢复后涂布到抗性培养基上筛选获得带有YFP- NbSMG7重组质粒的农杆菌；

（5）将带有重组质粒的农杆菌侵染烟草叶片，经分化培养获得愈伤组织，再经生根培养获得小苗，转移继续培养；

（6）继续培养的小苗生长稳定后，取叶片样品，用CTAB法从植物叶片中提取DNA，以提取DNA为模板进行PCR扩增，确定YFP-NbSMG7是否转化成功；所使用的引物序列为：

35S-F：cgcaagacccttcctctatataaggaa，

NbSMG7-R：CACAAACAAACGGCCTTC；如SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:3所示，

以上样品抽提总蛋白，进行SDS-PAGE凝胶电泳，再使用GFP抗体进行Western blot确定植物表达了带YFP荧光标签的YFP-NbSMG7；对转化成功的过表达YFP-NbSMG7转基因烟草留种。