[发明专利]新冠肺炎病毒和甲型流感病毒同时快速检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于新冠肺炎病毒和甲型流感病毒同时快速检测的试剂盒，其特征在于：包括引物组和DNA片段，PCR缓冲液；

所述引物组包括新冠肺炎病毒引物组和甲型流感病毒引物组，其中：新冠肺炎病毒引物组包括ORF1ab-GC+F、ORF1ab-R、N基因-GC+F、N基因-R，对应的序列依次如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示；甲型流感病毒引物组包括Flu-M-GC+F、Flu-M-R，序列分别如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6所示；

所述DNA片段包括新冠肺炎病毒DNA片段和甲型流感病毒DNA片段，其中：新冠肺炎病毒DNA片段包括ORF1ab部分片段和N基因部分片段，其序列分别如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示；甲型流感病毒DNA片段包括H1N1-M基因部分片段、H3N2-M基因部分片段、H5N1-M基因部分片段和H7N9-M基因部分片段，其序列依次如SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12所示；

所述PCR缓冲液包括5µl 10×EasyTaq®Buffer，4µl 10mmol/L dNTPs，1 µl 上游引物，1 µl下游引物，1 µl Taq酶，DNA片段1.0 µl，37µl ddH₂O；4µl Forward GSP，4µlReverseGSP，10µl 2×TS One-Step Reaction Mix，0.4µl TransScript® One-StepEnzymeSuperMix，7µl RNase-free Water。

2.一种非疾病诊断或治疗目的的新冠肺炎病毒和甲型流感病毒同时快速检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，对阴性样本、DNA片段及样品分别进行PCR扩增，阴性样本扩增产物作为待测样品的阴性对照；DNA片段扩增产物作为待测样品的参照，即待测样品的阳性对照；样品PCR扩增产物作为DGGE检测的待测样品；

所述DNA片段包括新冠肺炎病毒DNA片段和甲型流感病毒DNA片段，其中：新冠肺炎病毒DNA片段包括ORF1ab部分片段和N基因部分片段，其序列分别如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示；甲型流感病毒DNA片段包括H1N1-M基因部分片段、H3N2-M基因部分片段、H5N1-M基因部分片段和H7N9-M基因部分片段，其序列依次如SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12所示；

用于扩增所述阴性样本、DNA片段及样品的引物组包括新冠肺炎病毒引物组和甲型流感病毒引物组，其中：新冠肺炎病毒引物组包括ORF1ab-GC+F、ORF1ab-R、N基因-GC+F、N基因-R，对应的序列依次如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示；甲型流感病毒引物组包括Flu-M-GC+F、Flu-M-R，序列分别如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6所示；

步骤2，对参照片段和待测样品进行DGGE检测；

步骤3，DGGE检测完毕后，将含有DNA片段及待测样品的凝胶放入2.5×4S Red Plus染液中染色15分钟，拍照进行分析对比，当待测样品条带与作参照的新冠肺炎病毒DNA片段条带在DGGE凝胶上处于同一水平位置时，说明待测样品为含有新冠肺炎病毒的阳性样品；当待测样品条带与作参照的甲型流感病毒DNA片段条带在DGGE凝胶上处于同一水平位置时，说明待测样品为含有甲型流感病毒的阳性样品；当待测样品条带与作参照的新冠肺炎病毒DNA片段条带和甲型流感病毒DNA片段条带在DGGE凝胶上都处于同一水平位置时，说明待测样品为同时含有甲型流感病毒和新冠肺炎病毒的阳性样品；否则为阴性样品。

3.根据权利要求2所述的一种非疾病诊断或治疗目的的新冠肺炎病毒和甲型流感病毒同时快速检测的方法，其特征在于，所述DGGE检测的条件为：选择浓度为8%-10%的聚丙烯酰胺凝胶，胶变性范围为40%-60%，梯度混合制胶；电泳液温度上升至60℃时，先180V恒压预电泳5分钟，用50μL微量进样器快速上样，上样量为25μL；在60℃，200V条件下恒温恒压电泳7h。