[发明专利]复合磷脂脂质体中mPEG2000-DSPE、DOPE和M5三种磷脂含量的检测方法

说明书

本发明建立了一种HPLC－CAD法同时测定复合磷脂脂质体，尤其是COVID19 LPP疫苗中三种磷脂(mPEG2000‑DSPE、DOPE和M5)的方法。以10mM醋酸铵溶液为流动相A，甲醇为流动相B进行梯度洗脱，mPEG2000‑DSPE、DOPE和M5三种磷脂色谱峰面积与其质量浓度的线性相关系数平方(R²)大于0.99，三种磷脂的平均回收率在94.5％～102.4％之间，RSD均小于1.3％。该方法无需溶剂萃取，可直接分析复合磷脂脂质体，实现了mPEG2000‑DSPE、DOPE和M5与其他组分的良好分离，具有重现性好、稳定性高、前处理简单、快捷、易于操作的特点，并可同时测定复合磷脂脂质体中mPEG2000‑DSPE、DOPE和M5的含量，达到了定量分析相关要求，适用于复合磷脂脂质体制备工艺的筛选与验证、稳定性试验和产品质量的检查。

技术领域

本发明涉及一种mRNA脂质体疫苗的质量控制方法，具体而言，涉及复合磷脂脂质体中同时检测mPEG2000-DSPE、DOPE和M5三种磷脂含量的检测方法。

背景技术

脂质体是指将药物包封于类脂质双分子层内形成的微型泡囊体，常用作抗肿瘤药物载体，现在已经发展成为成熟的一类新型靶向制剂。脂质体由于稳定性差使其发展受到限制，主要原因为磷脂在储存的过程中容易发生氧化分解；而磷脂并非单一的化合物，是基架结构相同但脂肪酸链不同的一类物质的混合物，由此限制了磷脂材料的检测。由于脂质体的成分比较复杂，常规脂质体中一般都包含胆固醇、磷脂等主要功能性辅料，而磷脂的降解产物及其本身的杂质又比较多且复杂，因此给脂质体中多种磷脂的检测工作带来一定的难度。

中国药典2010版中明确指出，注射剂所用的原辅料应从来源及工艺等生产环节进行严格控制并应符合注射用的质量要求。同时，根据药品质量行业标准，作为一种功能性药用辅料，磷脂在药物制剂中的含量需要被准确定量，而现有文献方法却十分复杂，给药物制剂研究带来了一定的困难。

磷脂的研究手段多样，目前测定磷脂含量的方法，主要有高效液相色谱法、钼蓝比色法、紫外分光光度法、荧光法、硫氰铁铵显色法、薄层色谱法、以及核磁共振法等。而在实际应用中，通常对特定磷脂的检测需要有特定的检测方法。CN101692038提供了一种比色法测定脂质体中磷脂的方法；研究者赵宝琴提供了钼蓝比色法对磷脂软胶囊中磷脂含量进行测定的方法(亚麻酸磷脂软胶囊中磷脂含量测定，人参研究，2015(03:36-37))；龚金炎提供了一种测定卵磷脂中磷脂含量的硫氰铁铵显色法(硫氰亚铁铵比色法测定蛋黄卵磷脂中总磷脂含量，食品工业，2018,039(008):319-322)，这些方法所用试剂涉及仪器种类多、操作步骤复杂，也不能对多种磷脂成分进行有效分离。Hatziantoniou S则采用薄层色谱法联合火焰离子检测器分离分析脂质体磷脂组成，但是流动相复杂，色谱峰形效果差(Method ofsimultaneous analysis of liposome components using HPTLC/FID[J].Methods inmolecular biology，(Clifton,N.J.),2010,606(606):363-368)。