[发明专利]复合磷脂脂质体中mPEG2000-DSPE、DOPE和M5三种磷脂含量的检测方法在审

专利信息
申请号: 202011549984.0 申请日: 2020-12-24
公开(公告)号: CN114660188A 公开(公告)日: 2022-06-24
发明(设计)人: 邱旭辉;李炜玮;孙宝来;赵国凤;张育坚;李航文 申请(专利权)人: 斯微(上海)生物科技股份有限公司
主分类号: G01N30/02 分类号: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/64;G01N30/86
代理公司: 北京永新同创知识产权代理有限公司 11376 代理人: 程大军
地址: 200120 上海市浦东新区中国(上海*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 复合 磷脂 脂质体 mpeg2000 dspe dope m5 含量 检测 方法
【权利要求书】:

1.一种高效液相色谱同时检测mPEG2000-DSPE、DOPE和M5三种磷脂含量的方法,其特征在于,所述方法采用高效液相色谱-电雾式检测器检测,流动相A为10mM醋酸铵溶液,流动相B为甲醇,进行梯度洗脱。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的梯度洗脱程序为:

时间(min)流动相A(%)流动相B(%)
01090
100100
140100
151090
201090

3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述的流动相A的配制方法为:称量醋酸铵7705mg到1L的溶剂瓶中,加入1000mL超纯水溶解超声15min;流动相B采用的甲醇为色谱级甲醇;所述的高效液相色谱条件为:色谱柱为C8色谱柱,流动相流速为1.0mL/min,柱温为35℃。

4.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述的电雾式检测器检测条件为:蒸发温度35℃,Filter为3.6,Rate:5Hz。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括标准品制备,所述标准品制备包括mPEG2000-DSPE、DOPE和M5标准品的制备,主要步骤为:先分别用乙醇溶解或稀释mPEG2000-DSPE、DOPE或M5,等体积混合,再用甲醇稀释到7个系列浓度,分别如下表所示:

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括样品处理,所述样品处理主要步骤为:取100μL样品到离心管,加入100μL二次蒸馏水和200μL的2%Triton 100到离心管,混匀,室温下反应1小时。

7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的2%Triton 100的制备方法为:取20μLTriton 100加入到980μL二次蒸馏水中,37℃水浴中溶解,混匀。

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