[发明专利]一种农药残留快速检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种农药残留快速检测试剂盒，主要由乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂和磷酸盐缓冲溶液组成，其中所述乙酰胆碱酯酶采用新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼提取获得，所述底物为硫代乙酰胆碱，所述显色剂由5,5，‑二硫代‑2,2‑二硝基苯甲酸和碳酸氢钠组成，该试剂盒含有源自海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼的乙酰胆碱酯酶，该乙酰胆碱酯酶酶源丰富易得，且酶活好，对多种有机磷和氨基甲酸酯类农药的灵敏度高，保存时间长，检测限能达到相关要求。本发明还公开了上述试剂盒的制备方法，该制备方法步骤简洁，成本低。

技术领域

本发明属于农药残留快速检测技术领域，具体涉及一种农药残留快速检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

气相色谱、液相色谱等实验室检测方法是检测农药残留的常规方法，灵敏度高，特异性强，但检测费用昂贵，且受场地的限制。我国农产品通过农贸市场渠道销售的比重近70％，流通性强，单靠实验室检测方法和仪器是难于及时、快速而全面地从源头监控食品安全状况。

根据我国当前的国情，对农副产品批发市场以及超市等食品零售网点进行食品安全监督，乃至经营商自身管理，都需要配以现场抽样和快速检测。现场快速检测作为发现食品安全问题的第一步，具有不可替代的作用。

CN101503731A中公开了一种农药残毒快速检测试剂盒的制备方法，是含有乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶混合物的农药残毒快速检测试剂盒，由胆碱酯酶，底物，显色剂(DTNB)和磷酸缓冲液组成。

中国专利文献CN106191212A中公开了一种农药残毒快速检测试剂盒，包括胆碱酯酶酶粉、底物、显色剂和缓冲剂，胆碱酯酶酶粉为胆碱酯酶与稳定剂的复合物。

应用上述发明专利虽然在小区域范围内解决了部分农产品的有机磷和氨基甲酸酯类的农药残留问题，但是上述这些专利产品存在以下缺点：胆碱酯酶制作繁琐，制作成本高，制作时间长，难以规模化生产满足市场需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种农药残留快速检测试剂盒，该试剂盒含有来自海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼的乙酰胆碱酯酶，乙酰胆碱酯酶酶源丰富易得，且酶活好，对多种有机磷和氨基甲酸酯类农药的灵敏度高，保存时间长，检测限能达到相关要求。

本发明的目的还在于提供上述农药残留快速检测试剂盒的制备方法，该制备方法步骤简洁，成本低。

本发明的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种农药残留快速检测试剂盒，主要由乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂和磷酸盐缓冲溶液组成，其中所述乙酰胆碱酯酶采用新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼提取获得，所述底物为硫代乙酰胆碱，所述显色剂由5,5，-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸(DTNB)和碳酸氢钠组成。

优选的，所述乙酰胆碱酯酶采用新鲜海鱼提取获得的具体过程包括：

(1)选取新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼的肌肉组织，与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆，得到海鱼肌肉组织酶液；

(2)取步骤(1)中制得的海鱼肌肉组织酶液，加入表面活性剂、稳定剂和防腐剂，并用磷酸盐缓冲液定容，得到乙酰胆碱酯酶混合液；

(3)将步骤(2)中制得的混合酶液水浴后冷却，再离心处理，离心后取上清液，即得到乙酰胆碱酯酶酶液。

在该采用新鲜海鱼提取获得乙酰胆碱酯酶的过程中：

优选的，步骤(1)中所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.0～8.5，其与新鲜海鱼的肌肉组织的用量关系为6～25mL：1g。

优选的，步骤(1)中所述磷酸盐缓冲溶液由无水磷酸氢二钾和磷酸二氢钾用蒸馏水溶解制成，其中无水磷酸氢二钾的浓度为10～15g/L，所述磷酸二氢钾的浓度为2.5～4.0g/L，本申请中所采用的磷酸盐缓冲溶液均在此范围内。