[发明专利]一种农药残留快速检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种农药残留快速检测试剂盒，其特征是主要由乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂和磷酸盐缓冲溶液组成，其中所述乙酰胆碱酯酶采用新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼提取获得，所述底物为硫代乙酰胆碱，所述显色剂由5,5，-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸和碳酸氢钠组成。

2.根据权利要求1所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：所述乙酰胆碱酯酶通过以下方法制备获得：

(1)选取新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼的肌肉组织，与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆，得到海鱼肌肉组织酶液；

(2)取步骤(1)中制得的海鱼肌肉组织酶液，加入表面活性剂、稳定剂和防腐剂，并用磷酸盐缓冲液定容，得到乙酰胆碱酯酶混合液；

(3)将步骤(2)中制得的混合酶液水浴后冷却，再离心处理，离心后取上清液，即得到乙酰胆碱酯酶酶液。

3.根据权利要求2所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：步骤(1)中所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.0～8.5，其与新鲜海鱼的肌肉组织的用量关系为6～25mL：1g。

4.根据权利要求2所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：步骤(2)中所述海鱼肌肉组织酶液的用量为乙酰胆碱酯酶混合液总体积的3～5％。

5.根据权利要求2所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：步骤(2)中所述表面活性剂为吐温-80、羟丙基甲基纤维素和聚乙二醇中的一种或两种的组合，其用量为乙酰胆碱酯酶混合液总体积的0.05～5％；所述稳定剂为甘露醇、海藻糖和丙二醇中的一种或两种的组合，其用量为乙酰胆碱酯酶混合液总体积的3～8％；所述防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠和脱氢乙酸钠中的一种或两种的组合，其用量为乙酰胆碱酯酶混合液总质量的2～10％。

6.根据权利要求2所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：步骤(3)中水浴时在35～37℃的条件下水浴12～30min，然后冷却至室温；离心处理时使用离心机以5000～12000r/min离心10～30min。

7.根据权利要求1所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：所述硫代乙酰胆碱的浓度为6～10mg/mL。

8.根据权利要求1所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：所述显色剂中5,5，-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸的浓度为7～10mg/mL，所述碳酸氢钠的浓度为0.7～0.9mg/mL，采用磷酸盐缓冲溶液配制。

9.权利要求1-8任一项所述的农药残留快速检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)选取新鲜海鱼的肌肉组织，与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆，得到海鱼肌肉组织酶液；

(2)取步骤(1)中制得的海鱼肌肉组织酶液，加入表面活性剂、稳定剂和防腐剂，并用磷酸盐缓冲液定容，得到乙酰胆碱酯酶混合液；

(3)将步骤(2)中制得的混合酶液水浴后冷却，再离心处理，离心后取上清液，即得到乙酰胆碱酯酶酶液；

(4)选取硫代乙酰胆碱用蒸馏水溶解，制得底物；

(5)取5,5，-二硫代-2,2，-二硝基苯甲酸和碳酸氢钠，用磷酸盐缓冲溶液溶解，制得显色剂；

(6)将乙酰胆碱酯酶酶液、底物、磷酸盐缓冲溶液和显色剂单独包装，在进行农药残留快速检测时，分别取出即可使用。