[发明专利]一种利用细菌非生长耦联特性生产β-1,3-葡聚糖的方法

权利要求书

1.一种利用细菌非生长耦联特性生产β-1,3-葡聚糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将产β-1,3-葡聚糖菌株进行活化，制备种子培养液；

S2.将种子培养液接入发酵培养基中，进行发酵培养；

发酵培养温度为28～32℃，起始pH7.0，搅拌转速120～200r/min，通风量0.35～0.65v.v.m，在发酵pH下降至5.4拐点之前通氧，通氧压力0.3～0.5Mp，通氧10～15min；待发酵液细胞浓度7.5g/L时，停止发酵；

S3.发酵结束后，将60～80％的发酵液转入转化罐内；向剩余20～40％的发酵液中加入发酵培养基至初始发酵体积，再继续进行二次发酵，发酵结束后，再将60～80％的发酵液转入转化罐内；如此循环5～6次；

S4.向转化罐内分次流加糖液，进行全细胞转化：

首次流加时间为发酵液转入后1h内；

第二次流加时间为发酵液转入后30～35h；

第三次流加时间为发酵液转后40～45h；

转化温度28～32℃，搅拌转速120～200r/min，通风量0.3～0.5v.v.m，糖液流加速度0.4～0.5m³/h，pH值维持在5.5～6.0，转化总时间为58～65h。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述产β-1,3-葡聚糖菌株为土壤杆菌ATCC31749。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，制备种子培养液所用种子培养基的组成：以质量百分比计，蔗糖1.0～2.0％；(NH₄)₂HPO₄ 0.5～1.0％；KH₂PO₄0.15～0.2％；MgSO₄·7H₂O 0.1％；CaCO₃ 0.3％；玉米浆粉0.15～0.5％；pH调节至7.2；

28～32℃、150～240r/min振荡培养16～24小时，得到种子培养液。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，发酵培养基的组成为：以质量百分比计，蔗糖5.0％；(NH₄)₂HPO₄ 0.5～1.0％；KH₂PO₄ 0.15～0.2％；MgSO₄·7H₂O 0.1％；CaCO₃0.15％；玉米浆粉0.1～0.5％；pH调节至7.0。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流加糖液的总体积为初始发酵体积的20-40％；

首次流加时，糖液的加入量为初始发酵液体积的7.5-15％；

第二次流加时，糖液的加入量为初始发酵液体积的7.5-15％；

第三次流加时，糖液的加入量为初始发酵体积的5-10％。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，首次流加时还添加3-6mg/LUMP促进代谢因子。

7.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述糖液为质量浓度为20-50％的蔗糖溶液。