[发明专利]一种治疗骨关节炎的间充质干细胞制剂及制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种治疗骨关节炎的间充质干细胞制剂及制备方法与应用，治疗骨关节炎的间充质干细胞制剂，制备间充质干细胞制剂的原料包括玻璃酸钠、富血小板血浆、间充质干细胞、氨基葡萄糖和硫酸软骨素，本发明治疗骨关节炎的间充质干细胞制剂利用已经有确切的润滑作用的玻璃酸钠联合已经有确切促进软骨再生修复能力的富血小板血浆，再加上具有生活活性、可多向分化、具有强大再生和修复能力的间充质干细胞，再适当配比其它生物试剂，制备成混合生物制品，一次性应用于治疗部位，病程可缩短到5周，减少10周，并且应用的剂量准确，患者注射次数减少2/3，是一项医患双方互惠的治疗方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种治疗骨关节炎的间充质干细胞制剂及制备方法与应用。

背景技术

骨关节炎是一种退行性病变，属于老年病中的常见病、高发病，目前已普遍步入老龄化社会，骨关节炎病人已经接近1个亿，而且随着老龄化进程的加剧，患病人数越来越多。其中关节软骨的损伤是不可逆转的，目前骨关节炎常规的治疗以中医治疗、物理治疗、药物治疗、封闭治疗等为主流方向，但疗效不理想，远期疗效更差，也有应用玻璃酸钠关节腔注射，富血小板血浆关节腔注射、各种细胞再生疗法，但都不统一，没有固定标准，导致临床结论差异较大，不利于新疗法的临床数据统计，也不利于患者的治疗。

目前，常规治疗要完成骨关节炎的治疗程序至少要15周，不利于临床推广。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗骨关节炎的间充质干细胞制剂及制备方法与应用，以解决现有技术中治疗程序时间长，不利于临床推广的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面，提供一种治疗骨关节炎的间充质干细胞制剂，制备间充质干细胞制剂的原料包括玻璃酸钠、富血小板血浆、间充质干细胞、氨基葡萄糖和硫酸软骨素，各组分的体积份数分别为玻璃酸钠1-5份、富血小板血浆1-5份、间充质干细胞1-5份、氨基葡萄糖1-2份、硫酸软骨素1-2份。所述的氨基葡萄糖可选自医用几丁糖。

根据本发明实施例的第二方面，提供一种间充质干细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、提取富血小板血浆和间充质干细胞，备用；

步骤二、将玻璃酸钠、富血小板血浆、间充质干细胞、氨基葡萄糖和硫酸软骨素混合均匀，获得所述的间充质干细胞制剂。

进一步的，所述的步骤一中富血小板血浆的提取方法包括将全血离心后分成三层，上层为血清、中层为富含血小板的血浆层、下层为红细胞层；无菌条件下抽取中层的血浆层，获得富血小板血浆。

进一步的，步骤一中提取间充质干细胞的方法包括以下步骤：

1)清洗，用蒸馏水将脐带冲洗干净，然后用酒精棉将脐带表面擦拭干净；

2)酶解，取出脐带粉碎处理，之后进行酶解处理；

3)过滤，向脐带酶解液中加入蒸馏水，使用筛网进行初步过滤，然后倒入差速分离机中进一步过滤；

4)原代培养，将过滤后的脐带细胞接种到无血清基础培养基中进行培养，培养时间为2天；

5)传代培养，更换无血清培养基，并在无血清培养基中添加无血清营养添加物，定期更换培养基，直至产生细胞簇；

6)活性检测，从不同位置细胞簇中分别取部分细胞并分组标号，将不同组的细胞分别进行诱导分化培养，检测分化后的细胞活性，剔除细胞活性较差的细胞簇；

7)冷冻保存，将优选后的细胞簇分组保存在保温罐中，保温罐的温度应为4℃。

进一步的，步骤2)中酶解处理的方法包括使用浓度为0.1％的胶原酶Ⅱ处理，酶解时间为6～8小时。