[发明专利]一种治疗骨关节炎的间充质干细胞制剂及制备方法与应用

权利要求书

1.一种治疗骨关节炎的间充质干细胞制剂，其特征在于：制备间充质干细胞制剂的原料包括玻璃酸钠、富血小板血浆、间充质干细胞、氨基葡萄糖和硫酸软骨素，各组分的体积份数分别为玻璃酸钠1-5份、富血小板血浆1-5份、间充质干细胞1-5份、氨基葡萄糖1-2份、硫酸软骨素1-2份。

2.一种如权利要求1所述间充质干细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、提取富血小板血浆和间充质干细胞，备用；

步骤二、将玻璃酸钠、富血小板血浆、间充质干细胞、氨基葡萄糖和硫酸软骨素混合均匀，获得所述的间充质干细胞制剂。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤一中富血小板血浆的提取方法包括将全血离心后分成三层，上层为血清、中层为富含血小板的血浆层、下层为红细胞层；无菌条件下抽取中层的血浆层，获得富血小板血浆。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤一中提取间充质干细胞的方法包括以下步骤：

1)清洗，用蒸馏水将脐带冲洗干净，然后用酒精棉将脐带表面擦拭干净；

2)酶解，取出脐带粉碎处理，之后进行酶解处理；

3)过滤，向脐带酶解液中加入蒸馏水，使用筛网进行初步过滤，然后倒入差速分离机中进一步过滤；

4)原代培养，将过滤后的脐带细胞接种到无血清基础培养基中进行培养，培养时间为2天；

5)传代培养，更换无血清培养基，并在无血清培养基中添加无血清营养添加物，定期更换培养基，直至产生细胞簇；

6)活性检测，从不同位置细胞簇中分别取部分细胞并分组标号，将不同组的细胞分别进行诱导分化培养，检测分化后的细胞活性，剔除细胞活性较差的细胞簇；

7)冷冻保存，将优选后的细胞簇分组保存在保温罐中，保温罐的温度应为4℃。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤2)中酶解处理的方法包括使用浓度为0.1％的胶原酶Ⅱ处理，酶解时间为6～8小时。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤3)中向脐带酶解液中加入5倍体积的蒸馏水。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤3)中酶解液在差速离心机中的离心时间应为10min，离心力应为200g。

8.一种如权利要求1所述间充质干细胞制剂于膝关节炎、肩关节炎、髋关节炎中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：治疗膝关节炎时，膝关节腔注射7毫升/次，5次/疗程；治疗肩关节炎时，肩关节腔注射3毫升/次，5次/疗程；治疗髋关节炎时，髋关节腔注射5毫升/次，5次/疗程。

10.一种如权利要求1所述间充质干细胞制剂在骨关节炎、软骨再生以及修复再生因退行性变引起的人体部分机能减退中的应用。