[发明专利]一种肺炎支原体及其耐药突变的引物探针组合及检测试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种肺炎支原体及其耐药突变的引物探针组合及检测试剂盒。该引物探针组合包括：如SEQ ID NO：1～2所示的肺炎支原体的特异性引物对；如SEQ ID NO：3所示的肺炎支原体敏感型的检测探针；如SEQ ID NO：4所示的肺炎支原体2063位点耐药突变的检测探针；和如SEQ ID NO：5所示的肺炎支原体2064位点耐药突变的检测探针。本发明引物和探针具有良好的特异性，结合real time PCR检测方法，能够实现对肺炎支原体及其耐药突变的快速、准确、灵敏的鉴定和耐药比例的计算。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种肺炎支原体及其耐药突变的引物探针组合及检测试剂盒。

背景技术

肺炎支原体(MP)是人类的一种重要病原菌，可引起社区感染。近年来，随着抗生素的广泛使用，有些肺炎支原体对四环素类抗生素产生抗药性，耐药性增强现象越来越引起人们的重视。

肺炎支原体的检测方法多种多样，分离培养是微生物检测的“金标准”，该法虽然可靠，但耗时、费力不能满足快速检测的需要，常用的免疫荧光法虽然具有一定特异性和敏感性，但由于抗体的种类和浓度的影响，结果不稳定，有时会出现假阳性。为克服上述问题，多重荧光定量RT-PCR技术被用来诊断肺炎支原体及其耐药性的感染，这种方法具有快速、敏感、特异性强等特点，探针能够区分敏感型和耐药型并能计算耐药菌比例，大大地提高了检测效率。

但是目前，针对肺炎支原体及其耐药性鉴定的引物探针的设计存在不合理的现象，导致多数检测试剂无法实现准确、快速、灵敏的检测。如授权公告号CN 102002522 B发明的引物探针检测灵敏度为100Copies/ml。公布号CN 106191239 A发明的引物探针检测灵敏度为1000Copies/ml，在检测过程中需要分3管分别进行检测，工作量大且检测通量低。公布号CN 103820557 A发明的引物探针只能进行敏感株和2063位点突变株检测。且上述三件专利方法均无法判断肺炎支原体混合感染的耐药比例。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种肺炎支原体及其耐药突变的引物探针组合及检测试剂盒。引物探针组合对肺炎支原体敏感型和突变型的最低检测限均为50copies/mL，且可以判断肺炎支原体混合感染的耐药比例。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种引物探针组合，其包括：

如SEQ ID NO：1～2所示的肺炎支原体的特异性引物对；

如SEQ ID NO：3所示的肺炎支原体敏感型的检测探针；

如SEQ ID NO：4所示的肺炎支原体2063位点耐药突变的检测探针；

和如SEQ ID NO：5所示的肺炎支原体2064位点耐药突变的检测探针。

本发明中肺炎支原体的引物和探针用于对肺炎支原体定性，不论是耐药型肺炎支原体还是23sRNA敏感型的肺炎支原体，都能够被该引物或探针检测。

在本发明中，针对不同的肺炎支原体株型，SEQ ID NO：1～2所示引物对扩增的片段如SEQ ID NO：9～11所示。

如SEQ ID NO：9所示扩增的片段为肺炎支原体敏感型；

如SEQ ID NO：10所示扩增的片段为肺炎支原体2063突变型；

如SEQ ID NO：11所示扩增的片段为肺炎支原体2064突变型。

作为优选，引物探针组合还包括：

如SEQ ID NO：6～7所示的内标扩增引物对；

如SEQ ID NO：8所示的内标探针。