[发明专利]一种肺炎支原体及其耐药突变的引物探针组合及检测试剂盒

权利要求书

1.一种引物探针组合，其特征在于，其包括：

如SEQ ID NO：1～2所示的肺炎支原体的特异性引物对；

如SEQ ID NO：3所示的肺炎支原体敏感型的检测探针；

如SEQ ID NO：4所示的肺炎支原体2063位点耐药突变的检测探针；

和如SEQ ID NO：5所示的肺炎支原体2064位点耐药突变的检测探针。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述SEQ ID NO：1～2所示引物对扩增的片段如SEQ ID NO：9～11所示。

3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合还包括：

如SEQ ID NO：6～7所示的内标扩增引物对；

如SEQ ID NO：8所示的内标探针。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的引物探针组合，其特征在于，所述探针的3’端连接淬灭基团，5’端连接荧光基团；其中：

如SEQ ID NO：3所示探针的5’端连接FAM荧光基团；

如SEQ ID NO：4～5所示探针的5’端连接VIC荧光基团；

如SEQ ID NO：8所示探针的5’端连接ROX荧光基团。

5.权利要求1至4中任一项所述引物探针组合在制备检测肺炎支原体及其耐药突变的试剂盒中的应用。

6.一种肺炎支原体及其耐药突变的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1至4中任一项所述的引物探针组合及Real time PCR反应试剂。

7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述Real time PCR反应试剂包括如下试剂中的一种或几种：dNTPs、UDG酶、Taq酶、MgCl₂。

8.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性对照和阳性对照；所述阴性对照为无菌水，阳性对照为人工合成的浓度(0.1～10)×10⁶Copies/mL的假病毒。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述Real time PCR反应的体系为：

dNTPs：200～300μM/mL；

UDG酶：0.1～0.3U/μL；

Taq酶：15～20U/μL；

MgCl₂：0.1～3mmol/μL；

上下游引物：各350～400nM/mL；

探针：各150～200nM/mL；

待测样本：20～30μL；

水补足至40μL。

10.根据权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于，所述Real time PCR反应的程序为：

50℃2min；

95℃10min；

95℃15s，60℃15s，72℃10s，共40个循环。