[发明专利]一种大麦休眠基因MKK3的KASP功能分子标记及应用

权利要求书

1.一组引物组合物，其特征在于：分别延长SNP A³⁰⁴¹前后40bp碱基序列后获得。

2.一组引物组合物，其特征在于：包括正向引物AL1，其序列如SEQIDNO.3所示；正向引物AL2，其序列如SEQIDNO.4所示；反向引物C，其序列如SEQIDNO.5所示。

3.权利要求1或2所述引物组合物在鉴定、筛选大麦MKK3休眠等位基因，或鉴定、筛选大麦种子休眠性及穗发芽抗性，或培育抗穗发芽大麦品种中的应用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于：以待测样品的基因组DNA为模板，利用所述引物组合物对模板进行荧光定量PCR扩增，利用扩增结果进行MKK3基因分型。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于：在各引物的5’端添加不同的标记基团，发芽率小于20％的为携有强休眠等位基因的植株，发芽率大于20％的为携有弱休眠等位基因的植株；可识别出正向引物AL2标记的标记基团的待测样品为携有MKK3强休眠等位基因的植株类型；和/或；可识别出正向引物AL1标记的标记基团的待测样品为携有MKK3弱休眠等位基因的植株类型。

6.根据权利要求4所述应用，其特征在于：所述标记基团为荧光修饰基团。

7.根据权利要求4所述应用，其特征在于：包括如下步骤：

(1)提取待测大麦样品DNA；

(2)取浓度为50～100ng/μL的模板DNA 1.0μL、混合引物0.7μL、KASP Master Mix 5.0μL、双蒸水加至总量为10μL；所述混合引物为正向引物AL1、正向引物AL2、反向引物C的混合溶液；

PCR扩增反应条件为：95℃预变性15分钟；95℃变性20秒，65℃梯度退火并延伸60秒，10个循环，每个循环退火及延伸的温度降低0.7℃；94℃变性20秒，57℃退火并延伸60秒，共32个循环；完成后进行荧光读数；

(3)分析PCR扩增产物等位基因类型；检测出Allele C的样品为携有MKK3强休眠等位基因的植株类型，检测出Allele A的样品为携有MKK3弱休眠等位基因的植株类型。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于：所述混合引物的制备方法为：正向引物AL1、正向引物AL2、反向引物C均按照10μM的浓度，分别取150μL、150μL和300μL进行混合后得到。

9.一种含有权利要求1或2所述引物组合物的产品，其特征在于：用于鉴定、筛选大麦MKK3休眠等位基因，或鉴定、筛选种子休眠性及大麦穗发芽抗性，或培育抗穗发芽大麦品种。

10.根据权利要求9所述产品，其特征在于：所述产品为试剂盒。