[发明专利]一种识别PAM序列为NRTH的SpCas9n变体及相应碱基编辑系统

权利要求书

1.一种识别PAM序列为NRTH的SpCas9n变体，其特征在于，其中，N为A、T、C或G；R为A或T；H为A，T或C，所述SpCas9n变体为：序列表中SEQ ID NO：1所示序列。

2.一种水稻碱基编辑系统，其特征在于，所述水稻碱基编辑系统包括融合蛋白和转录sgRNA的DNA分子，所述融合蛋白由SpCas9n蛋白变体和腺嘌呤脱氨酶ABE组成，所述SpCas9n蛋白变体的基因序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，腺嘌呤脱氨酶ABE基因序列如序列表中SEQ ID NO：2所示；

所述sgRNA靶向目标靶点序列；

所述目标靶点序列的PAM序列为NRTH，其中，N为A、T、C或G；R为A或T；H为A，T或C。

3.一种用于权利要求2所述的水稻碱基编辑系统的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括表达盒一和表达盒二；所述表达盒一表达权利要求2中所述的融合蛋白；所述表达盒二表达权利要求2中所述的sgRNA。

4.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒表达权利要求2中所述的融合蛋白。

5.一种权利要求2所述的水稻碱基编辑系统的应用，其特征在于：所述应用包括将权利要求2所述的碱基编辑系统导入目标受体内，提高水稻基因组上为NRTH的PAM序列附近的A:T 突变成G:C的定点替换效率，获得含有突变位点的转基因植物或植物部分。

6.一种权利要求3所述的重组表达载体的应用，其特征在于：所述应用包括将权利要求3所述的重组表达载体导入目标受体内，提高水稻基因组上为NRTH的PAM序列附近的A:T 突变成G:C的定点替换效率，获得含有突变位点的转基因植物或植物部分。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述目标受体为植物愈伤组织。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于：导入受体的过程为经过侵染、共培养、筛选步骤来实现，进而得到编辑后的植物愈伤组织，然后利用愈伤组织分化成植株。