[发明专利]大豆炭疽病抗性鉴定方法

说明书

本发明公开了一种大豆炭疽病抗性鉴定方法，包括以下步骤：利用平头炭疽菌，配制浓度为35～45mg/L的菌丝悬浮液；将待抗性鉴定的大豆播种于无菌土上于无菌的温室中生长，待生长至豆荚鼓粒初期，采荚；将菌丝悬浮液均匀喷洒到豆荚上，直到豆荚上菌丝悬浮液溢流停止喷雾，待豆荚上菌丝悬浮液不再溢流后置于培养皿中进行培养；接种4～6d后采用图像分析系统扫描计算病斑面积占全荚面积百分比，分析各待抗性鉴定的大豆的病情指数；根据大豆炭疽病病情指数进行品种的抗感特性评价。本发明的大豆炭疽病抗性鉴定方法，使用方便、能快速有效区分大豆炭疽病抗性。

技术领域

本发明属于作物抗性育种技术领域，具体涉及一种大豆炭疽病抗性鉴定方法。

背景技术

大豆炭疽病是大豆生产，尤其是鲜食大豆生产中主要病害之一。大豆各部位都可能受到炭疽病的侵染，豆荚及叶片的症状为黑褐色“同心轮”状或条状病斑，茎上呈褐色条形病斑。大豆炭疽病发生南方重于北方，尤其是对南方鲜食大豆生产造成严重影响，严重田块病荚率可达85％以上，一旦发生导致外观品质下降，造成重大的经济损失。在生产上，防治主要使用的是杀菌剂，可在一定程度上控制和减小该病害的损失，然而生化防治会增加生产成本导致生态环境和食品安全问题，同时也易导致病原菌产生抗药性导致防治效果不稳定。因此选育和推广抗病品种是防治该病最经济有效安全的方法，而抗性鉴定是抗病育种研究的前提和基础。目前大豆炭疽病抗性鉴定主要采取的方法是活体孢子喷雾接种法。即在大豆豆荚鼓粒初期对豆荚进行孢子喷雾接种，接种后，套袋保湿24h，待感病材料发病到最高级的时候统计发病情况。活体接种一般在田间自然环境中进行虽然更接近自然发病，然而对于抗性鉴定而言易受温度、湿度等不可控环境因素影响会造成结果准确性较低，需要多年数据才能得到较准确的抗性鉴定结果。同时活体接种比较耗时耗力只适用于小样本量抗性鉴定，且一个种植季每份材料只能接种一次，因此整体鉴定效率较低。同时有些高感材料接种后发病较快，故待感病材料发病到最高级的统计发病情况进行鉴定会导致对抗性材料筛选压力太小，较难筛选到优异的抗性材料。

综上所述，采用孢子悬浮液活体侵染虽然更接近自然发病(抗性鉴定结果更准确)，但此方法比较耗时耗力只适用于小样本量抗性鉴定，且一个种植季每份材料只能接种一次，因此整体鉴定效率较低。因此，需要对该技术进行改进。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种使用方便、能快速有效区分抗性的大豆炭疽病抗性鉴定方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种大豆炭疽病抗性鉴定方法，包括以下几个步骤：

步骤A：材料准备：

利用平头炭疽菌，配制浓度为35～45mg/L的菌丝悬浮液；

将待抗性鉴定的大豆播种于无菌土上于无菌的温室中生长，待生长至豆荚鼓粒初期，采荚；

步骤B:离体豆荚菌丝喷雾接种:

将菌丝悬浮液均匀喷洒到豆荚上，直到豆荚上菌丝悬浮液溢流停止喷雾，待豆荚上菌丝悬浮液不再溢流后置于培养皿(15cm培养皿)中，培养皿中事先放置用于保湿的含无菌水的滤纸(培养皿中事先放置滤纸并加入3mL无菌水用于保湿)；接种后，将装有豆荚的培养皿置于光照植物培养箱内25±1℃黑暗培养24h后改为14h黑暗/10h光周期培养，培养温度为25±1℃；

步骤C:抗性评价:

接种4～6d后采用图像分析系统扫描计算病斑面积占全荚面积百分比，分析各待抗性鉴定的大豆的病情指数；根据大豆炭疽病病情指数进行品种的抗感特性评价；

0级：无病斑；

1级：病斑面积占整个豆荚面积的10.00％以下；

2级：病斑面积占整个豆荚面积的10.01％～35.00％；

3级：病斑面积占整个豆荚面积的35.01％～65.00％；