[发明专利]大豆炭疽病抗性鉴定方法

权利要求书

1.大豆炭疽病抗性鉴定方法，其特征是包括以下步骤：

步骤A：材料准备：

利用平头炭疽菌，配制浓度为35～45mg/L的菌丝悬浮液；

将待抗性鉴定的大豆播种于无菌土上于无菌的温室中生长，待生长至豆荚鼓粒初期，采荚；

步骤B:离体豆荚菌丝喷雾接种:

将菌丝悬浮液均匀喷洒到豆荚上，直到豆荚上菌丝悬浮液溢流停止喷雾，待豆荚上菌丝悬浮液不再溢流后置于培养皿中，培养皿中事先放置用于保湿的含无菌水的滤纸；接种后，将装有豆荚的培养皿置于光照植物培养箱内25±1℃黑暗培养24h后改为14h黑暗/10h光周期培养，培养温度为25±1℃；

步骤C:抗性评价:

接种5d后采用万深图像分析系统扫描计算病斑面积占全荚面积百分比，分析各待抗性鉴定的大豆的病情指数；根据大豆炭疽病病情指数进行品种的抗感特性评价；

0级：无病斑；

1级：病斑面积占整个豆荚面积的10.00％以下；

2级：病斑面积占整个豆荚面积的10.01％～35.00％；

3级：病斑面积占整个豆荚面积的35.01％～65.00％；

4级：病斑面积占整个豆荚面积的65.01％～90.00％；

5级：病斑面积占整个豆荚面积的90.00％以上；

病情指数计算公式为：

病情指数(DI，Disease index)＝[(∑各级病荚数×各级严重度)/(调查总荚数×5)]×100；

根据病情指数将大豆炭疽病的抗性等级分为5类：

高抗(HR，Highly resistant)：0≤DI15；

抗病(R，Resistant)：15≤DI35；

中抗(MR，Moderately resistant)：35≤DI65；

感病(S，Susceptible)：65≤DI85；

高感(HS，Highly susceptible)：DI≥85。

2.根据权利要求1所述的大豆炭疽病抗性鉴定方法，其特征是：

所述步骤A为：

A.1)、菌丝悬浮液制备：

平头炭疽菌菌株在PDA培养基平板上培养5d后用打孔器取5个直径为4mm的菌丝块，加入到200mL的PDB中，放入摇床，100rpm/min，25℃孵育5天；将菌丝体过滤后用无菌水洗涤3次，2500rpm/min离心收集菌丝体，打碎菌丝体，按35～45mg/L的浓度配置菌丝悬浮液；

A.2)、大豆材料：

将待抗性鉴定的大豆播种在含无菌土的容器中置于温室中生长，待生长至豆荚鼓粒初期采荚进行离体菌丝喷雾接种。