[发明专利]一种利用天然氨基单糖降低大肠杆菌耐压性的方法

说明书

一种利用天然氨基单糖降低大肠杆菌耐压性的方法，属于消毒灭菌领域技术领域，具体方法包括配置MES缓冲液；用磷酸盐缓冲液配制质量浓度为10%的氨基葡萄糖溶液并温和孵育；在MES缓冲液中接种大肠杆菌；在大肠杆菌中加入温和孵育后的氨基葡萄糖溶液，形成样品溶液；迅速移入超高压设备内，对样品进行超高压处理，最后进行后续大肠杆菌的菌落培养和总数检测。本发明首次将氨基葡萄糖与超高压技术协同用于大肠杆菌的杀灭，即采用添加经温和孵育的氨基葡萄糖的方法，对大肠杆菌进行协同杀灭；可有效减低大肠杆菌耐压性；使用的材料如氨基葡萄糖等价格低廉，配制及使用方法简单，对技术人员要求低，适合食品加工企业大规模采用。

技术领域

本发明涉及消毒灭菌领域，具体涉及一种利用天然氨基单糖降低大肠杆菌耐压性的方法。

背景技术

大肠杆菌特别是食源性致病菌肠出血性大肠杆菌(EHEC)长期威胁大众食品安全，是食品安全领域的重要隐患因素之一，该类致病菌的感染剂量非常低，不到10个细胞即可致人死亡，致死率高达30％。近年来EHEC曾在牛肉、豆芽和面粉等多种食品中被检出，造成严重的食品安全事件。

传统食品加工领域通常采用热加工方法处理杀灭EHEC，效果不够理想。近年来，超高压技术(high hydrostatic pressure，HHP)作为非热加工技术越来越受欢迎，在400～600MPa条件下，HHP可有效减少致病菌和腐败菌，从而达到食品在低温条件下的杀菌效果，同时保留食品的品质，该技术目前已经在世界范围内得到广泛应用。然而研究发现，即使食品经过HHP处理，依然有部分致病菌存活下来。曾有研究发现，将100株大肠杆菌E.coli分别进行HHP(600MPa)处理，发现绝大多数E.coli的菌落数减少不到5log(cfu/mL)，由此可知大多数属于耐压菌株。因此，如何实现大肠杆菌的高效杀灭，是目前消毒灭菌技术领域的一大难题。

氨基葡萄糖又称葡萄糖胺、葡糖胺或氨基葡糖，是葡萄糖的一个羟基被氨基取代后的化合物，是自然界含量最丰富的单糖之一，是生物细胞内许多重要多糖的基本组成单位，经常被用于骨关节炎的膳食辅助治疗。目前氨基葡萄糖与HHP对大肠杆菌的共同作用尚未见明确报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种利用天然氨基单糖降低大肠杆菌耐压性的方法，解决现有技术中即使经过HHP处理、依然有较高比例的大肠杆菌菌株存活下来、不能有效降低到合理标准的问题。

为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

一种利用天然氨基单糖降低大肠杆菌耐压性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、配置MES缓冲液，调整pH范围为5～6；

骤二、用pH为7.4的磷酸盐缓冲液配制质量浓度为10％的氨基葡萄糖溶液，将其置于35℃～38℃条件下温和孵育1～3天；

步骤三、在步骤一配置的MES缓冲液中接种大肠杆菌，至大肠杆菌数为10⁶～10⁸log(cfu/mL)；

步骤四、在步骤三培养的大肠杆菌中加入步骤二温和孵育后的氨基葡萄糖溶液，至氨基葡萄糖的最终质量浓度为1.0％～3.0％，形成样品溶液；

步骤五、迅速取一定量的步骤四的样品溶液移入超高压设备内；

步骤六、对样品进行超高压处理，压力为600MPa，温度为20℃，时间为3～15min；

步骤七、将步骤六处理后的样品溶液从超高压设备内取出；

步骤八、进行后续大肠杆菌的菌落培养和总数检测。

其中，作为本发明的优选技术方案，所述步骤二中，将质量浓度10％的氨基葡萄糖溶液置于37℃条件下温和孵育48小时。