[发明专利]利用地中海拟无枝酸菌发酵生产利福霉素的培养基和培养方法

说明书

本发明涉及一种利用兽疫链球菌发酵生产利福霉素的培养基和培养方法，本发明在培养基中引入了脱脂蚕蛹粉、鱼熔浆蛋白粉和产朊假丝酵母蛋白粉，利用这三种物质组成新的培养基配方，确认了利用地中海拟无枝酸菌发酵生产利福霉素的种子培养基、发酵培养基中碳源、氮源和最佳配伍比例利，以此为基础，其大生产的发酵技术水平是32000μg/ml，处于国内领先水平。

技术领域

本发明属于生物发酵技术领域，特别是涉及一种利用地中海拟无枝酸菌发酵生产利福霉素的培养基和培养方法。

背景技术

利福霉素是由地中海拟无枝酸菌产生的一类安莎大环内酯类抗生素。这类抗生素的毒性低、疗效高且抗菌谱较广，广泛应用于治疗G+(革兰氏阳性菌)、结核病、麻风病和与艾滋病有关的分枝杆菌感染。

从20世纪50年代末期发现利福霉素之后，国际国内很多专家学者对其结构性质及其发酵工艺进行了大量的研究，促使其发酵单位有了很大的提升，但近年来我国利福霉素的工业化水平提高缓慢，主要原因是我国利福霉素的生产采用三级发酵模式，该方式存在如下问题：

1 目前，相关文献资料报道了国内利福霉素发酵单位一般在10000～20000μg/ml。各个利福霉素生产企业发酵技术水平差别较大。

2 现有技术中，利福霉素培养基的碳源主要采用葡萄糖，葡萄糖1）在培养基高温灭菌过程中容易被碳化；2）生产反应过程中易产生“美拉德反应”，即产生抑制菌体的有毒物质，从而影响发酵效价。

3 国内利福霉素发酵技术中，有些在培养基组成中加入了动物蛋白胨，发酵培养结束，发酵液中残留了部分动物蛋白，增加了发酵液的粘度，增加了该产品下游工艺提取和纯化的难度。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种可有效提高发酵单位，同时降低生产成本，降低提取纯化难度的利用地中海拟无枝酸菌发酵生产利福霉素的培养基。

本发明的另一目的是提供利用上述培养基发酵生产利福霉素的培养方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种利用地中海拟无枝酸菌发酵生产利福霉素的培养基，其特征在于包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其中

所述一级培养基组成为：木薯淀粉28～32g/L、脱脂蚕蛹粉23～27g/L、鱼熔浆蛋白粉42～46g/L、玉米浆干粉53-57g/L、硫酸铵0.4～0.8g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；

所述二级种子培养基的组成为：

木薯淀粉37～41g/L、脱脂蚕蛹粉24～28g/L、鱼熔浆蛋白粉43～48g/L、玉米浆干粉55～59g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；

所述发酵培养基的组成为：

木薯淀粉48～52g/L、脱脂蚕蛹粉20～24g/L、鱼熔浆蛋白粉31～35g/L、玉米浆干粉62～66g/L、产朊假丝酵母蛋白粉18～22g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、磷酸二氢钾0.1～0.5g/L、氯化钠0.002～0.006g/L、硫酸锌0.03～0.07g/L、硫酸亚铁0.1～0.5g/L、硫酸锰0.003～0.007g/L，椰油酰胺基丙基甜菜碱0.1～0.5g/L、硝酸钾0.2～0.6g/L、聚醚改性硅油2～6ml/L。

2、一种利用权利要求1所述培养基发酵生产利福霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为：

1） 一级种子培养：先将一级种子培养基灭菌并冷却至室温，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的利福霉素摇瓶发酵液接入一级种子培养基中进行种子培养，至菌体浓度17～21%移种；