[发明专利]利用地中海拟无枝酸菌发酵生产利福霉素的培养基和培养方法

权利要求书

1.一种利用地中海拟无枝酸菌发酵生产利福霉素的培养基，其特征在于包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其中

所述一级培养基组成为：木薯淀粉28～32g/L、脱脂蚕蛹粉23～27g/L、鱼熔浆蛋白粉42～46g/L、玉米浆干粉53-57g/L、硫酸铵0.4～0.8g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；

所述二级种子培养基的组成为：

木薯淀粉37～41g/L、脱脂蚕蛹粉24～28g/L、鱼熔浆蛋白粉43～48g/L、玉米浆干粉55～59g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；

所述发酵培养基的组成为：

木薯淀粉48～52g/L、脱脂蚕蛹粉20～24g/L、鱼熔浆蛋白粉31～35g/L、玉米浆干粉62～66g/L、产朊假丝酵母蛋白粉18～22g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、磷酸二氢钾0.1～0.5g/L、氯化钠0.002～0.006g/L、硫酸锌0.03～0.07g/L、硫酸亚铁0.1～0.5g/L、硫酸锰0.003～0.007g/L，椰油酰胺基丙基甜菜碱0.1～0.5g/L、硝酸钾0.2～0.6g/L、聚醚改性硅油2～6ml/L。

2.一种利用权利要求1所述培养基发酵生产利福霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为：

1） 一级种子培养：先将一级种子培养基灭菌并冷却至室温，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的利福霉素摇瓶发酵液接入一级种子培养基中进行种子培养，至菌体浓度17～21%移种；

2） 二级种子培养：先将二级种子培养基灭菌并冷却至室温，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度18～22%移种；

3） 发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至室温，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至利福霉素化学效价＞32000μg/ml时终止发酵。

3.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述培养好的利福霉素摇瓶发酵液菌体浓度为22～26%；镜检无杂菌。

4.按照权利要求3所述的培养方法，其特征在于

所述一级种子培养条件为：罐压0.03～0.05MPa；罐温27～28℃；空气流量20～40m³/h，搅拌转速60～80r/min；

所述二级种子培养条件为：罐压0.03～0.05MPa；罐温27～28℃；空气流量40～60m³/h；搅拌转速60～80r/min；

所述发酵培养条件为：

a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在7.3-7.4；

b 温度：27～28℃；

c 搅拌转速：转速控制在80-100r/min；

d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa；

e pH控制：发酵过程中pH控制在7.2-7.9；

f 空气流量：150～200m³/h；

h 溶氧控制：

发酵前40h，不控制溶氧；

40h～120h：溶氧控制在40%以上。

5.按照权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补丙酸铵、补水、补木薯淀粉，其中

a 补丙酸铵工艺控制：

发酵周期40h时，补入丙酸铵，控制其在发酵液中的浓度控制在0.01～0.05g/L；

b 补水工艺控制：

发酵时间在40～120h，当菌体浓度超过26%时，加入灭菌水，补入量以控制菌体浓度在22～25%为宜；

发酵时间在120h～发酵结束，加入灭菌水，补入量以控制发酵液体积为发酵罐的75-80%为宜；

c 补入木薯淀粉：

发酵40-120h，当总糖含量＜10mg/100ml时，补入已灭菌的木薯淀粉溶液，使总糖的含量控制在10～15mg/100ml。